本公开涉及癌症免疫疗法的。
背景技术：
1、免疫疗法已成为癌症治疗领域的游戏规则改变者。基于免疫检查点的疗法的发展正以惊人的速度前进。尽管如此，只有小部分患者对免疫疗法有反应。癌症免疫疗法中的一个具体挑战是基于机制鉴定生物标志物，该标志物可用于鉴定此类治疗的候选物并指导疾病的管理决策(topalian等人，n engl j med，366(26):2443-54(2012))。因此，一个重要的问题是选择患者，因为它可以避免治疗相关的毒性和不太可能受益的患者的花费。
2、为了确保一旦肿瘤抗原刺激反应，不会持续活化免疫炎性反应，多个控制或“检查点”就位(in place)或被活化。这些检查点大多数由t细胞受体代表，其与周围肿瘤微环境中细胞上的配体结合，形成免疫突触，然后调节t细胞的功能。
3、vista(t细胞活化的v结构域ig抑制子(suppressor))是一种负检查点控制蛋白，其调节t细胞活化和免疫反应。它是一种i型跨膜蛋白，其包含单个ig样v型结构域(该结构域与b7和cd28家族的相似结构域具有同源性)和一个胞内结构域。vista胞质尾结构域包含两个潜在的蛋白激酶c结合位点和可以充当停靠位点的脯氨酸残基，表明vista可能既作为受体又作为配体。
4、vista与pdl-1同源，但显示出一种仅限于造血区室的独特的表达模式。vista在髓样细胞和粒细胞上最高表达，在t细胞上较低水平表达，在b细胞上不存在(wang等人，jem208(3)：577-592(2011)；flies等人，j.immunology 187(4)：1537-1541(2011))。经过活化或免疫后，在t细胞和髓样细胞群上诱导vista，表明炎症诱导vista表达(wang等人，同上)。另一方面，尽管有报道说人胃癌细胞以低频率表达vista等人，oncoimmunology，6：4，e1293215(2017))，但在肿瘤细胞中未检测到vista表达(le mercier等人，cancer res；74：1933–44(2014))。当存在时，vista表达似乎仅限于结肠癌或肺癌的肿瘤微环境中的浸润性cd11b+细胞。但是，需要注意的是，需要进一步的研究来鉴定可能与肿瘤微环境中vista表达相关的肿瘤表征(lines等人，cancer immunol res；2(6)：510-7(2014))。
5、vista似乎既作为t细胞上的负受体，又作为在apc上表达的与t细胞上未知受体相互作用的配体。
6、一些发现表明，vista通过作为配体与t细胞上未知受体相互作用，负调节t细胞应答。像pd-l1一样，vista是显著抑制免疫的配体(lines等人，cancer res；74：1924–32(2014))，并且像pd-l1一样，阻断vista可以在临床前的肿瘤学模型中形成对癌症的治疗性免疫(参见le mercier等人，见上文)。尽管阻断vista增强免疫，尤其是cd8+和cd4+介导的t细胞免疫，但是用vista(vista-ig)的细胞外结构域的可溶性ig融合蛋白处理，可在体外抑制(inhibit)t细胞增殖和细胞因子产生，而且vista在mca105肿瘤细胞上的过表达干扰小鼠保护性抗肿瘤免疫(wang等人，同上)。此外，施用vista特异性单克隆抗体增强了体内cd4+t细胞应答并在小鼠中形成自身免疫(wang等人，同上)。另一方面，vista似乎具有与其他ig超家族成员非冗余的功能活性，并且可能在癌症中自身免疫形成和免疫监视中发挥作用。具体而言，虽然使用fc融合蛋白的研究清楚地表明vista具有配体活性(wang等人，同上，lines等人，同上)，还已经描述了受体样信号传导活性(flies等人，j clin invest；124：1966-75(2014))。事实上，许多研究支持vista作为t细胞上的受体的直接负作用。
7、众所周知，免疫细胞浸润物的组成不仅在不同的肿瘤实体之间不同，而且在相同解剖部位的肿瘤内也不同。作者推测，对不同免疫治疗组合的反应可能取决于患者的免疫环境(farkona等人，bmc medicine 14:73(2016))。在此方面，已知可以诱导pdl-1表达逃避免疫攻击(sharma等人cell,168:707-23(2017))。pdl-1表达显示出肿瘤内和肿瘤间不同(mino-kenudson，cancer biol med,13(2):157-70(2016))，但与对抗pd-1抗体的客观反应相关(topalian等人，同上)。另一方面，尚未鉴定出介导蛋白质作用的vista结合伴侣(lemercier等人，frontiers in immunology,6:418(2015))。尽管已经启动两项针对抗vista分子的i期临床试验，但尚无能够预测患者对这些治疗反应的生物标志物。因此，有必要确定vista的结合伴侣，因为这将有助于治疗形成，并能够选择对抗vista治疗剂治疗易感的患者。
8、与本文描述的那些类似或等同的所有方法和材料都可以用于本发明的实践或测试中，其中本文描述了合适的方法和材料。除非另有说明，否则本发明的实践采用本领域技术范围内的常规技术或蛋白质化学、分子病毒学、微生物学、重组dna技术和药理学。这样的技术在文献中得到充分阐述(参见，例如，ausubel等人，short protocols in molecularbiology,current protocols；第5版，2002；remington’spharmaceutical sciences，第17版，mack publishing co.easton,pa.,1985年；和sambrook等人，molecular cloning:alaboratory manual,cold spring harbor laboratory press；第三版，2001年)。本文描述的与分子和细胞生物学、蛋白质生物化学、酶学以及医疗化学和药物化学结合使用的命名法以及实验室程序和技术是本领域公知和通常使用的。本文提及的所有出版物、专利申请、专利、和其他参考文献通过引用其整体并入本文。此外除非另有说明，否则材料、方法和实施例仅用于阐述目的而并不旨在限制本发明。
9、根据以下具体说明和实施方案，本发明的其他特征和优势将是显而易见的。
技术实现思路
1、本公开具体地涉及以下实施方案：
2、实施方案1.一种用于体外诊断受试者中vista介导的肿瘤的方法，所述方法包括以下步骤：
3、a)使所述受试者的生物样本与能够特异性结合psgl-1核酸或蛋白质的试剂接触；以及
4、b)定量所述试剂与所述生物样本的结合，从而确定在所述样本中psgl-1的表达水平。
5、实施方案2.根据实施方案1所述的方法，其中所述试剂选自dna探针、rna探针和抗psgl-1抗体。
6、实施方案3.根据实施方案1或2中任一项所述的方法，其中定量肿瘤微环境的免疫浸润物中的psgl-1的结合。
7、实施方案4.根据实施方案1至3中任一项所述的方法，其进一步包括通过将步骤(b)的水平与基于两个参数的合适量表进行比较从而对肿瘤进行评分的步骤，所述两个参数是染色强度和阳性细胞的百分比。
8、实施方案5.根据实施方案1至4中任一项所述的方法，还包括将步骤b)的表达水平与参考水平进行比较的步骤，其中与参考水平相比，步骤(b)中的psgl-1的测定水平增加指示为vista介导的肿瘤。
9、实施方案6.根据实施方案5所述的方法，其中所述参考水平是正常组织样本中psgl-1的表达水平。
10、实施方案7.根据实施方案5或6中任一项所述的方法，其中：
11、·步骤a)还包括测量所述生物样本中的所述免疫浸润物的vista、cd11b、cd33、cd4和cd8中至少一种的表达水平；以及
12、·步骤b)包括将步骤a)的表达水平与对照水平进行比较，
13、与psgl-1和/或vista、cd11b、cd33、cd4或cd8的对照水平相比，psgl-1和/或vista、cd11b、cd33、cd4或cd8的测定水平增加指示为vista介导的癌症。
14、实施方案8.根据实施方案5至7中任一项所述的方法，其中所述vista介导的肿瘤选自：血液癌症(例如，白血病、淋巴瘤、或骨髓瘤)、膀胱癌、乳腺癌、结肠癌、结缔组织癌、直肠癌、胃癌、食道癌、肺癌、喉癌、肾癌、口腔癌、卵巢癌、或前列腺癌、或肉瘤、黑素瘤、或神经胶质瘤、或这些癌症中任何一种的转移。
15、实施方案9.一种抗vista治疗剂用于治疗患者中的vista介导的癌症中的用途，所述用途包括根据实施方案1至8所述诊断所述患者的所述vista介导的癌症的在先步骤。
16、实施方案10.根据实施方案9所述的抗vista治疗剂的用途，其中所述试剂是抗vista抗体。
17、实施方案11.根据实施方案10所述的抗vista治疗剂的用途，其中所述抗vista抗体选自：
18、a)抗vista抗体，所述抗体包含重链和轻链，所述重链包含由kabat定义的序列seqis no:1296、1354和1393的3个cdr；以及所述轻链包含由kabat定义的序列seq is no:1432、1477和1499的3个cdr；以及
19、b)抗vista抗体，所述抗体包含重链和轻链，所述重链包含由kabat定义的序列seqis no:1296、1559和1393的3个cdr；以及所述轻链包含由kabat定义的序列seq is no:1432、1633和1499的3个cdr。
20、实施方案12.根据实施方案10所述的抗vista治疗剂的用途，其中所述抗vista抗体是人源化的抗体。
21、实施方案13.根据实施方案9至12中任一项所述的抗vista治疗剂的用途，还包括调整使用抗vista治疗剂治疗的步骤，其中所述调整治疗是：
22、-如果所述患者已诊断出对抗vista治疗剂无应答，则减少或抑制所述抗vista治疗剂治疗，或
23、-如果所述患者已经诊断出对抗vista治疗剂有应答，则继续所述抗vista治疗剂治疗。
24、实施方案14.一种抗体，其激动或拮抗vista和psgl-1的相互作用。
25、实施方案15.根据实施方案14所述的抗体，其是激动性抗psgl-1抗体或抗体片段。
26、实施方案16.根据实施方案14所述的抗体，其是拮抗性抗psgl-1抗体或抗体片段。
27、实施方案17.根据实施方案16所述的抗体，所述抗体能够抑制或阻断psgl-1与vista的细胞外结构域的结合。
28、实施方案18.根据实施方案16所述的抗体，所述抗体能够抑制或阻断表达vista的细胞与表达psgl-1的t细胞的结合。
29、实施方案19.根据实施方案18所述的抗体，其中所述表达vista的细胞是髓样细胞、树突状细胞、巨噬细胞或t细胞。
30、实施方案20.根据实施方案18或19中任一项所述的抗体，其中所述表达vista的细胞是肿瘤细胞。
31、实施方案21.根据实施方案18至20中任一项所述的抗体，其中所述表达psgl-1的细胞是t细胞。
32、实施方案22.根据实施方案14至21中任一项所述的抗体，其中所述抗体不阻断或抑制psgl-1与p-选择蛋白、l-选择蛋白或e-选择蛋白的结合。
33、实施方案23.一种药物组合物，其包含实施方案14至22中任一项所述的抗体和生理上可接受的载体、赋形剂和/或稳定剂。
34、实施方案24.根据实施方案23所述的药物组合物，其进一步包含针对共抑制分子的拮抗剂、或针对共刺激分子的激动剂。
35、实施方案25.根据实施方案24所述的药物组合物，其中所述拮抗剂是针对共抑制分子的抗体。
36、实施方案26.根据实施方案24或25中任一项所述的药物组合物，其中所述共抑制分子选自cd86、cd80、pdl-1、pdl-2、ctla-4、pd1、lag3、btnl2、b7-h3、b7-h4、嗜乳脂蛋白、cd48、cd244、tim-3、cd200r、cd200、cd160、btla、hvem、lair1、tim1、半乳糖蛋白9、tim3、cd48、2b4、cd155、cd112、cd113和tigit。
1.抗vista抗体或其抗原结合片段，其包含重链和轻链，所述重链包含由kabat定义的序列seq id no：7、31和15的3个cdr；所述轻链包含由kabat定义的序列seq id no：19、23和26的3个cdr。
2.根据权利要求1所述的抗vista抗体，其中所述抗vista抗体是人源化抗体。
3.根据权利要求1所述的抗vista抗体，其中所述抗vista抗体包含重链和轻链，所述重链包含seq id no:36的vh；所述轻链包含seq id no:30的vl。
4.多核苷酸，其编码权利要求1所述的抗体。
5.载体，其包含权利要求4所述的多核苷酸。
6.宿主细胞，其包含权利要求5所述的载体。
7.制备权利要求1所述的抗体的方法，包括以下步骤：
8.药物组合物，其包含权利要求1所述抗体和至少一种生理学上可接受的载体、赋形剂和/或稳定剂。
