白花羊蹄甲提取物的抗糖化用途及检测方法

1.本发明涉及化妆品技术领域，特别涉及白花羊蹄甲提取物的抗糖化用途及检测方法。


背景技术：

2.近年来，糖基化终末产物(ages)主要作为糖尿病等疾病的标志物和羰基应激衰老理论中的关键物质进行研究。ages不仅会使皮肤弹性下降，色素堆积，产生皱纹这种外观性的变化，还会使皮肤屏障被破坏，皮肤相关细胞凋亡，发生炎症。此外，它具有不可逆性，不易被代谢，逐年累积下，皮肤从里至外发生深刻的变化。
3.主流的抗糖成分主要是肌肽、玻色因、硫辛酸、葡萄籽提取物、黄酮类、多酚类、阿魏酸、革糖素等。其中，肌肽是经国际研究证实真正有效的抗糖成分，且安全无毒，肌肽能在糖侵蚀肌肤前，通过与糖反应的型态，代替体内蛋白质与糖反应，从而帮助保护蛋白质不被糖基化，达到抗糖化的作用。革糖素是经国际研究证实有效的抗糖成分，革糖素通过预防和清除两条通路达到抗糖功效，保护肌肤中的蛋白不易被糖化，帮助加速分解肌肤中的晚期糖化终末产物，有实验表明其与烟酰胺共同作用时，革糖素具有放大烟酰胺抑制黑色素转移能力的功效。
4.一般来说，在20岁的时候，皮肤就可以观察到糖化的胶原蛋白，随着年龄的增长，皮肤中的ages就会增多，并且糖化的胶原蛋白无法被真皮机制重塑所降解然后再进行更新，因而一旦有所损伤很难修复。随着人们对皮肤老化问题的越来越重视，对抗糖化的研究也越来越得到重视，也需要更为科学和严谨的抗糖化功效实验来对物质的抗糖化功效进行定性和定量的检测。


技术实现要素：

5.本发明的目的在于提供白花羊蹄甲提取物的新用途。
6.本发明的第一方面提供了白花羊蹄甲提取物的抗糖化用途。
7.本发明的第二方面提供了白花羊蹄甲提取物在化妆品和/或护肤品中的应用，其中，所述白花羊蹄甲提取物为化妆品和/或护肤品中的抗糖化功效成分。
8.本发明所提供的应用中，所述化妆品和/或护肤品施用于皮肤外表面。
9.优选地，本发明所提供的应用中，所述化妆品和/或护肤品选自眼霜、面霜、精华、乳液、面膜精华液中的一种或几种。
10.优选地，本发明所提供的应用中，所述白花羊蹄甲提取物作为添加剂分散于基质原料中，所述基质原料选自油质原料、粉质原料、胶质原料中的一种或几种。
11.优选地，本发明所提供的应用中，所述化妆品和/或护肤品还包括：表面活性剂、香精与香料、色素、保湿剂、防腐剂、抗氧剂、紫外线吸收剂、螯合剂、收敛剂、助渗剂、营养性添加剂中的一种或几种。
12.本发明的第三方面提供了白花羊蹄甲提取物的抗糖化功效的检测方法，所述方法
为：将白花羊蹄甲粉碎，过筛，进行醇提，得到白花羊蹄甲提取物；将人i型胶原蛋白与果糖在45℃下孵育，模拟人体皮肤糖基化反应过程；检测白花羊蹄甲提取物对所述人体皮肤糖基化反应过程的作用功效。
13.相对于现有技术而言，本发明首次提出了白花羊蹄甲提取物的抗糖化用途，由此提示白花羊蹄甲提取物可作为化妆品或护肤品中的抗糖化功效成分。在本技术的发明人在对白花羊蹄甲提取物的抗糖化用途的研究过程中发现，现有技术中在验证某一种植物提取物或成分抑制ages生成(即抗糖化功效)作用时，通常采用的实验条件为牛血清白蛋白与果糖在37℃下孵育5天，模拟人体皮肤发生糖基化反应的过程。但是，发明人认为皮肤中与糖基化终末产物(ages)发生反应的主要蛋白为胶原蛋白，以牛血清白蛋白作为模拟条件并不能完全模拟皮肤糖基化反应。因此，本发明采用人i型胶原蛋白与果糖在45℃下孵育，模拟人体皮肤糖基化反应过程，以此对白花羊蹄甲提取物对人体皮肤糖基化反应过程的作用功效进行定性和定量，使得本技术中采用的检测方法更为科学严谨，得到的检测结果更为精确。
具体实施方式
14.为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明的各实施方式进行详细的阐述。然而，本领域的普通技术人员可以理解，在本发明各实施方式中，为了使读者更好地理解本技术而提出了许多技术细节。但是，即使没有这些技术细节和基于以下各实施方式的种种变化和修改，也可以实现本技术所要求保护的技术方案。
15.本发明的部分实施方式提供了白花羊蹄甲提取物的抗糖化用途。
16.本发明的部分实施方式提供了白花羊蹄甲提取物在化妆品和/或护肤品中的应用，其中，所述白花羊蹄甲提取物为化妆品和/或护肤品中的抗糖化功效成分。
17.本发明的实施方式所提供白花羊蹄甲提取物可应用于化妆品和/或护肤品中，所述化妆品和/或护肤品施用于皮肤外表面。
18.在本发明部分实施方式中，应用所述白花羊蹄甲提取物的化妆品和/或护肤品选自眼霜、面霜、精华、乳液、面膜精华液中的一种或几种。
19.本发明部分实施方式中，所述白花羊蹄甲提取物作为添加剂分散于基质原料中，所述基质原料选自油质原料、粉质原料、胶质原料中的一种或几种。
20.其中，所述油质原料可以是下述基质原料中的任意一种或几种组合：大豆油、橄榄油、杏仁油、蓖麻油、花生油、棉籽油、茶籽油、霍霍巴油、鳄梨油、椰子油、棕榈油、可可脂、米糠油、月见草油、小麦胚芽油、玉米胚芽油、棕榈蜡、木蜡、水貂油、海龟油、蛇油、蛋黄油、牛脂、马脂、猪脂、鹿脂、卵磷脂、羊毛脂、蜂蜡、鲸蜡、虫胶蜡、石蜡、凡士林、微晶蜡、地蜡、角鲨烷、羊毛脂蜡、羊毛脂醇、羊毛脂醇酯化物、乙酰化羊毛脂、乙酰化羊毛脂醇、羊毛脂酸、羊毛脂酸酯化物、聚氧乙烯羊毛脂、聚氧乙烯羊毛醇醚、聚氧丙烯羊毛醇醚、氢化羊毛脂、烷氧基化氢化羊毛脂、硅油(如：二甲基硅油、八甲基硅油、甲基苯基聚硅氧烷)、聚硅氧烷-聚氧烷基嵌段共聚物、甲基含氢硅油、cn脂肪酸及其酯、cn脂肪醇及其酯；其中，n≥10，并优选为10-24，更优选为12-20，如14、16、17、18。
21.所述cn脂肪酸如：月桂酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、硬脂酸、油酸、亚油酸、芥酸、癸酸。
22.所述cn脂肪醇如：月桂醇、鲸蜡醇、硬脂醇、异硬脂醇、油醇、椰油醇。
23.所述cn脂肪酸酯、cn脂肪醇酯如：肉豆蔻酸异丙酯、肉豆蔻酸肉豆蔻酯、十四醇乳酸酯、十六醇乳酸酯、棕榈酸异丙酯、棕榈树异辛酯、硬脂酸丁酯、硬脂酸异辛酯、硬脂酸单甘油脂、硬脂酸聚乙二醇酯、油酸癸酯、辛酸甘油酯、癸酸甘油酯、甘油三油酸酯。
24.所述粉质原料可以是下述基质原料中的任意一种或几种组合：云母、碳酸镁、钛白粉、锌白粉、氢氧化钙、碳酸钙、高岭土、硬脂酸钙、硬脂酸锌、硬脂酸镁、滑石粉、二氧化硅、氢氧化铝、焦磷酸钙、碳酸氢钙、膨润土。
25.其中，所述油脂原料可以是植物油质原料、动物油质原料、矿物油质原料、合成油质原料、半合成油质原料中的任意一种或几种。如：淀粉、环糊精、黄原胶、角叉胶、瓜尔豆胶、阿拉伯胶、黄芪胶、琼脂、虫胶、海藻酸钠、明胶、甲基纤维素、乙基纤维素、羧甲基纤维素钠、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、聚纤维素醚季铵盐、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酸钠、聚氧乙烯、乙烯基吡咯烷酮/乙酸乙烯酯共聚物、卡波树脂、硅酸铝镁、c12-15醇苯甲酸酯。
26.其中，所述溶剂原料可以是下述基质原料中的任意一种或几种组合：水、乙醇、丙醇、异丙醇、异丁醇、乙二醇、1,2-丙二醇、环己烷、二氯二氟甲烷、四氟二氯乙烷、乙二醇单乙醚、二甘醇单乙醚、丙酮、甲基异丁基甲酮、醋酸乙酯、醋酸丁酯、乙酸戊酯、邻苯二甲酸二丁酯。
27.在本发明部分实施方式中，应用所述白花羊蹄甲提取物的化妆品和/或护肤品还包括：表面活性剂、香精与香料、色素、保湿剂、防腐剂、抗氧剂、紫外线吸收剂、螯合剂、收敛剂、助渗剂、营养性添加剂中的一种或几种。
28.其中，所述表面活性剂可以是：1)阴离子表面活性剂，如：c12-14脂肪醇硫酸铵、c12-14脂肪醇聚氧乙烯醚羧酸盐、十二烷基硫酸二乙醇胺盐、c12-14脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸铵、十二烷基硫酸三乙醇胺、醇醚邻苯二甲酸单酯钠盐、酰化肽、月桂酸单乙醇酰胺硫酸钠、正辛醇聚氧丙烯醚琥珀酸单酯磺酸盐、十六醇琥珀酸单酯磺酸盐、磺基琥珀酸单酯二钠盐、琥珀酸单十八酯二钠盐、醇醚磺基琥珀酸单酯二钠盐、脂肪醇聚氧乙烯醚(钠)磺基琥珀酸单酯铵盐、油酰胺磺基琥珀酸单酯二钠盐、n-酰基谷氨酸钾盐、吡咯烷酮羧酸钠、聚丙烯酸钠、脂肪醇聚氧乙烯醚磷酸酯、脂肪醇聚氧乙烯醚磷酸单酯及其盐、脂肪醇聚氧乙烯醚磷酸单酯乙醇胺盐、烷基酚聚氧乙烯醚磷酸单酯及其盐、壬基酚醚磷酸单酯乙醇胺盐、烷基磷酸酯盐、邻苯二甲酸单月桂醇酯盐、十一碳烯酸锌、阴离子型氨基酸表面活性剂、n-c12-18酰基谷氨酸钠、n-月桂酰l-丙氨酸钠、n-硬脂酰基谷氨酸单钠盐、n-椰子酰基谷氨酸单钠盐、n-混合脂肪酰基谷氨酸单钠盐、长直链烷基芳醚磺酸钠th；2)非离子表面活性剂，如：油醇聚氧乙烯醚(如乳化剂vo系列)、烷基酚聚氧乙烯醚(如乳化剂ope系列)、硬脂酸聚氧乙烯酯、乙二醇单硬脂酸酯、二硬脂酸乙二醇酯、聚乙二醇单硬脂酸酯、聚乙二醇双硬脂酸酯、聚乙二醇双月桂酸酯、双硬脂酸甘油酯、三硬脂酸甘油酯、蔗糖硬脂酸酯、聚氧乙烯甘油醚单硬脂酸酯、n-月桂酰基谷氨酸双烷醇酯、苯甲酸脂肪醇酯、山梨醇单脂肪酸酯(司盘，span，如司盘-20、司盘60、司盘65、司盘-80、司盘-83、司盘-85)、聚氧乙烯醚山梨醇单脂肪酸酯(吐温，tween，如吐温-20、吐温-40、吐温-60、吐温-61、吐温-80)、二乙醇胺、三乙醇胺、脂肪酸单乙醇酰胺(如椰子油酸单乙醇酰胺、月桂酸单乙醇酰胺、棕榈酸单乙醇酰胺)、椰子油酸二乙醇酰胺、月桂酸二乙醇酰胺、甲基葡萄糖苷硬脂酸酯、聚氧乙烯甲基葡萄糖苷硬脂酸酯、乙二醇葡萄糖苷硬脂酸酯、丙二醇基葡萄糖苷硬脂酸酯、c8-16烷基葡萄糖苷、甘油葡萄
糖苷硬脂酸酯、琥珀酸月桂醇醚单酯、月桂醇甘油酯聚氧乙烯醚、硬脂酸甘露醇酐酯、聚氧乙烯貂油、貂油酸甲酯、貂油酸异丙酯；3)阳离子表面活性剂，如氯化c12-18烷基三烷基铵(如氯化十六烷基二甲基烷基铵、氯化十八烷基三甲基铵、氯化十六烷基三甲基铵)、氯化油酰胺丙基二羟丙基二甲基铵、氯化二羟丙基二甲基十二烷基铵、氯化二甲基二烯丙基铵/丙烯酰胺共聚物、氯化油酰胺丙基-2,3-二羟丙基二甲基铵、乙基硫酸油酰胺丙基二甲基乙基铵、氯化双c12-18基二甲基铵、聚季铵-11调理剂、m-505聚季铵-7调理剂、貂油酰胺丙基胺-壳聚糖、貂油酰胺丙基胺-水解蛋白、阳离子蛋白肽、瓜尔胶-羟丙基三甲基氯化铵盐、聚纤维素醚季铵盐、单油酸三乙醇胺酯、dnp系列；4)两性离子表面活性剂，如c12-18烷基二羟乙基甜菜碱、n-c12-18烷基-n-(2-羟乙基)-n-(2-甲酰胺基乙基)铵乙酸盐、c12-18烷氧基羟丙基甜菜碱、氧化椰油酰胺基丙基胺、椰油羟乙基磺酸钠、氧化十八烷基二甲基胺、椰油酰二乙醇胺氧化胺、n-烷基-β-氨基丙酰二乙醇胺、氧化月桂酰基丙胺、n-c12-18酰基谷氨酸、羟乙基癸酸咪唑啉甜菜碱、羟乙基肉豆蔻酸咪唑啉甜菜碱、羟乙基棕榈酸咪唑啉甜菜碱。
29.其中，所述香精与香料可以是选自：1)天然香料，如苦艾油、桉叶油、八角茴香油、白柠檬油、白丁香浸膏、丁香油、白兰花油、白兰花浸膏、白兰叶油、柏木油、薄荷油、苍术硬脂、草木犀浸膏、橙叶油、丁香罗勒油、大花茉莉浸膏、冬青油、当归油、当归浸膏、地衣酸、地檀香油、玳玳花油、玳玳叶油、风信子浸膏、枫香浸膏、芳樟油、黄樟油、甘松油、桂花浸膏、红橘油、胡萝卜籽油、海狸香、黄葵油、黄兰油、藿香油、黄蒿油、九里香浸膏、金合欢浸膏、姜油、橘子油、椒样薄荷油、菊花浸膏、枯茗油、龙涎香、留兰香油、灵猫香、腊梅油、铃兰浸膏、木香根油、米兰花油、玫瑰香叶油、玫瑰油、茉莉浸膏、牡蛎油、墨红浸膏、墨红油、柠檬桉叶油、柠檬油、七里香浸膏、楠叶油、芹菜籽油、肉豆蔻油、肉桂油、山苍子油、水貂香膏酊、水仙浸膏、松针油、树苔浸膏、素馨浸膏、麝香、麝鼠香膏、甜橙油、檀香油、晚香玉油、晚香玉浸膏、万寿菊精油、小茴香油、血桧木油、香茅油、香叶油、康乃馨油、紫苏油、香紫苏油、香附油、香柠檬薄荷油、岩兰草油、香薷油、香薷草浸膏、悬钩子蔷薇花油、悬钩子蔷薇花浸膏、薰衣草油、月桂叶油、依兰依兰油、芫荽籽油、鱼香草油、岩蔷薇浸膏、岩桂油、柚皮油、鸢尾油、烟草花油、香橼叶油、栀子花浸膏、紫穗槐油、紫罗兰叶浸膏、愈创木酚、4-甲基愈创木酚、4-乙基愈创木酚、天然香兰素、樟脑；2)合成香精，如柠檬烯、长叶烯、乙位石竹烯、异长叶烯、异长叶烯酮、异长叶烷酮、溴代苏合香烯、二苯甲烷、二苯醚、间甲基二苯醚、丁香酚、异丁香酚、乙位萘甲醚、乙位萘乙醚、对甲基茴香醚、异丁香酚苄醚、玫瑰醚、檀香醚、水仙醚(或茉莉醚)、降龙涎香醚、甲基柏木醚、环氧柏木烷、埃林塔尔、埃林塔尔n、3-己烯醇、癸醇、月桂醇、苯甲醇、苯乙醇、对甲氧基苄醇、肉桂醇、二甲基苄基甲醇、香叶醇、橙花醇、芳樟醇、玫瑰醇、松油醇、香茅醇、消旋薄荷脑、薄荷脑、冰片、柏木醇、柏木烷酮、甲基柏木酮、3,4-二氧亚甲基苯甲醇、α-甲基-3,4-二氢亚甲基苯丙醛、2-叔丁基-4-甲基环己醇、香紫苏醇、檀香醇、3-甲基-5-(2’,2’,3
’‑
三甲基环戊烯-1
’‑
基)戊-2-醇、苯甲醛、苯乙酮、苯乙酸、对甲基苯乙酮二苯甲酮、月桂醛、肉桂醛、肉桂酸、α-戊基-β-苯基丙烯醛、α-苯基丙醛、铃兰醛、新铃兰醛、兔耳草醛、3,4-二氧亚甲基苯甲醛、3,7-二甲基-6-辛烯醛、3,7-二甲基-7-羟基辛醛、柠檬醛、乙位环高柠檬醛、艾薇醛、柑青醛、4-羟基-3-甲氧基苯甲醛、α-二氢突厥酮、β-突厥烯酮、紫罗兰酮、6-甲基紫罗兰酮、橙花酮、香芹酮、胡椒基丙酮、覆盆子酮、药草酮、顺式茉莉酮、庚醛乙二醇缩醛、苯乙醛二甲缩醛、辛醛二甲缩醛、α-戊基桂醛二甲缩醛、柠檬醛二甲缩醛、柠檬醛二乙缩醛、茴香醛二甲缩醛、蘑菇醛、叶青素、风信子素、苹果酯、吉普缩酮、甲酸
香叶酯、甲酸香茅酯、阿弗曼酯、乙酸叶醇酯、乙酸苄酯、乙酸苯乙酯、乙酸肉桂酯、乙酸松油酯、乙酸龙脑酯、乙酸芳樟酯、乙酸香叶酯、乙酸对叔丁基环己酯、乙酸邻叔丁基环己酯、乙酸香根酯、乙酸琥珀酯、乙酸阿弗曼酯、乙酸十氢萘酯、乙酸柏木酯、丙酸香叶酯、乙酸三氯甲基苯甲酯、丁酸苄酯、丁酸叶醇酯、丁酸香叶酯、2-甲基戊酸苯乙酯、异丁酸对甲酚酯、2-壬烯酸甲酯、苯甲酸乙酯、苯甲酸甲酯、苯甲酸叶醇酯、苯甲酸苄酯、苯乙酸乙酯、苯乙酸对甲酚酯、肉桂酸乙酯、水杨酸丁酯、水杨酸异丁酯、水杨酸异戊酯、水杨酸叶醇酯、水杨酸己酯、水杨酸苄酯、水杨酸苯乙酯、水杨酸环己酯、茉莉素、茉莉酯、2-戊基环戊酮醋酸甲酯、橙花素、γ-壬内酯、γ-十一内酯、香豆素、吲哚、3-甲基吲哚、3,7-二甲基-2,6-辛二烯腈、对甲氧基苯甲腈、二甲苯麝香、酮麝香、2,6-二硝基-3-甲氧基-4-叔丁基甲苯、1,1-二甲基-4-乙酰基-6-叔丁基茚满、六甲基三环异色满麝香、1,1,2,3,3,6-六甲基-5-乙酰基茚满、麝香-t、麝香-m、麝香-l、麝香-f、11-氧杂环十六内酯、吐纳麝香；3)香精，玫瑰香精、茉莉香精、檀香香精、白兰香精。
30.其中，所述色素可以是选自如下组分中的一种或几种：二氧化锆、醋酸铅、硝酸银、叶绿素、叶绿素铜、亚铁氰化铁、鸟嘌呤、坚牢红、食品红i、还原红i、胭脂红、食用杨梅红、食用樱桃红、食品红17、苋菜红、坚牢绿、食品黄3、食用柠檬黄、食用苏丹黄、食用靛蓝、食品蓝2、荧光桃红、β-胡萝卜素、指甲花、栀子红色素、栀子绿色素、栀子蓝色素、栀子黄色素、钛云母珠光颜料、氧化铁红、氧化铁黄、氧化铁黑、氧化铬绿、氧氯化铋、碱性桃红、银朱r、喹啉黄、紫草宁、紫胶红色素、群青、酸性红87、酸性绿25、酸性荧光黄、酸性橙7、金光红53、立索尔宝红bk、立索尔宝红2r、永固橙。
31.其中，所述防腐剂可以是选自如下组分中的一种或几种组合：山梨酸及其盐、丙酸盐、对羟基苯甲酸酯、苯甲醇、苯甲酸及其盐、5-氯-2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮、-2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮、卡松、咪唑烷基脲、脱氢醋酸及其盐、亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、2,2-溴-2-硝基-1,3-丙二醇(布罗波尔)、异抗坏血酸及其盐、曲酸及其酯、壬二酸、松萝酸、间苯二酚。
32.其中，所述抗氧剂可以是选自如下组分中的一种或几种组合：sod、丁基羟基茴香醚、没食子酸酯、抗坏血酸及其盐、异抗坏血酸及其盐、谷甾醇、芦丁、生育酚。
33.其中，所述保湿剂可以是选自如下组分中的一种或几种组合：1,2-丁二醇、山梨醇、木糖醇、甘油、乳酸盐、聚乙二醇、dl-吡咯烷酮羧酸盐、d-葡萄糖、曲酸及其酯、尿酸、乳清酸、果胶酸、昆布氨酸、胶原蛋白、海藻糖、12、羟基硬脂酸胆甾醇酯。
34.其中，所述紫外线吸收剂可以是选自如下组分中的一种或几种组合：吡哆醇盐酸盐、曲酸及其酯、芦丁、芦荟苷、咖啡氨酸、橙皮素、2-乙基己基水杨酸酯、2-乙基己基对二甲基氨基苯酸酯、2-乙基己基对甲氧基肉桂酸酯、水杨酸苯酯、基邻氨基苯甲酸酯、2-羟基-4-甲氧基二苯甲酮、2-羟基-4-甲氧基二苯甲酮-5-磺酸、2-羟基-4-辛氧基二苯甲酮。
35.其中，所述螯合剂可以是选自如下组分中的一种或几种组合：edta二钠盐、双吡啶硫酮锌、硫代硫酸钠。
36.其中，所述收敛剂可以是选自如下组分中的一种或几种组合：苯酚对磺酸锌、羟基氯化铝、硫酸铝、硫酸铝钾、硫酸锌、氯化铝、氯化锌、卡拉明。
37.其中，所述助渗剂可以是选自如下组分中的一种或几种组合：二甲基亚砜、1-正十二烷基氮杂环庚-2-酮、2-氨基乙醇。
38.其中，所述ph值调节剂可以是选自如下组分中的一种或几种组合：酒石酸、乳酸、硼酸、琥珀酸。
39.其中，所述营养性添加剂可以是选自如下组分中的一种或几种组合：甲壳素、壳聚糖、丝肽、丝素、卵磷脂、表皮细胞生长因子、海藻糖、乳糖、珍珠粉、胶原蛋白、胶原水解物、透明质酸及其盐、蛋膜素、植物甾醇、氯化溶菌酶、硫酸软骨素钠、蜂乳、蜂胶、蜂蜜、甘草酸、甘草次酸、γ-亚麻酸、曲酸及其酯、赤霉酸、甘氨酸、l-天冬氨酸及其盐、l-胱氨酸及其盐、dl-丙氨酸、l-丝氨酸、dl-丝氨酸、l-蛋氨酸、dl-蛋氨酸、l赖氨酸盐酸盐、l苏氨酸、肌醇、麦芽醇、泛酸盐、d-泛醇、视黄醇醋酸酯、尿囊素、吡哆醇盐酸盐、可的松、烟酰胺、维生素、雌激素、苏木素、尿酸、乳清酸、芦荟苷、壬二酸、松香酸、松萝酸、昆布氨酸、胸腺素、茜草素、柠檬烯、黄芩黄素、脱氧胆酸、愈疮木萸、橙皮素、鞣酸、二硫化硒、茶皂苷、柠檬酸三乙酯、丁基羟基甲苯、植酸、聚氯化二甲基二烯丙基铵。
40.本发明的部分实施方式还提供一种白花羊蹄甲提取物的抗糖化功效的检测方法，所述方法为：将白花羊蹄甲粉碎，过筛，进行醇提，得到白花羊蹄甲提取物；将人i型胶原蛋白与果糖在45℃下孵育，模拟人体皮肤糖基化反应过程；检测白花羊蹄甲提取物对所述人体皮肤糖基化反应过程的作用功效，本技术中采用的检测方法科学严谨，得到的检测结果较为精确。
41.实验例
42.实验例中用到的仪器、试剂盒、细胞和试剂均可通过公开的商业渠道购买，为本领域常用的仪器、试剂盒、细胞和试剂，仪器和试剂盒的使用操作步骤按照其说明书的指导进行。
43.1.1白花羊蹄甲提取物的制备
44.1.1.1试剂与仪器
45.电子天平(tb-2002，北京赛多利斯仪器系统有限公司)；粉碎机(jp-400b-8)；超低温保存箱(dw-86l388a，海尔集团)；冷冻干燥机(virtis)；旋蒸仪；真空抽滤机。
46.1.1.2实验方法
47.粉碎机将白花羊蹄甲粉碎，过24目筛，备用。按料液比1：15(g/ml)的比例，称取原料10.0g以及溶剂(无水乙醇)150ml，加入无水乙醇后，在75℃下回流30min，过滤，取滤液，用旋转蒸发仪将滤液真空浓缩后蒸干，称重，备用。
48.1.2白花羊蹄甲体外非酶糖基化抑制实验
49.1.2.1主要仪器和试剂
50.仪器：多功能酶标仪(m200pro，tecan)；分析天平；移液枪(200μl、1ml、5ml)；恒温箱；涡旋器(ql861，海门市其抹贝尔仪器制造公司)。
51.试剂：人i型胶原蛋白；氨基胍硫酸水合物(a0309，东京化成工业株式会社)；叠氮化钠；果糖；na2hpo4·
12h2o(ar，国药集团化学试剂有限公司)；nah2po4·
2h2o(ar，国药集团化学试剂有限公司)。
52.1.2.2实验操作流程
53.配置pbs：配置ph为7.3-7.4的pbs，并在其中加入0.02％(质量百分含量)叠氮化钠。
54.配置人i型胶原蛋白液(20mg/ml)：称取0.5g人i型胶原蛋白，加pbs定容至25ml，
0.45μm水系滤膜过滤。
55.配置果糖溶液(0.5mol/l)：称取2.25g果糖，用pbs定容至25ml。
56.配置人i型胶原蛋白-果糖反应液：20ml人i型胶原蛋白液(20mg/ml)与20ml果糖溶液(0.5mol/l)混匀。
57.配置待测样品：先用pbs对10mg/ml的白花羊蹄甲提取物做稀释，梯度稀释为1000μg/ml、500μg/ml、50μg/ml、5μg/ml四个浓度的待测样品。
58.制备抑制组：将待测样品与人i型胶原蛋白-果糖反应液混合，作为抑制组。
59.制备阴性对照组：选用pbs代替待测样品，与人i型胶原蛋白-果糖反应液混合，作为阴性对照组。阴性对照组反映了体系中对非酶糖基化反应无抑制作用的情况。
60.制备阳性对照组：选用氨基胍作为阳性对照物，与人i型胶原蛋白-果糖反应液混合，作为阴性对照组。
61.制备空白组：将待测样品与pbs混合，不添加反应液，作为空白组。
62.以下表1所示不同试验组作为孵育体系，于45℃恒温培养箱内避光孵育，选择第21天检测各试验组的荧光强度rfu，激发波长370nm，发射波长为440nm。
63.表1反应体系建立
[0064][0065]
1.2.3数据处理
[0066]
每个样品设定3个平行，检测结果为3次测定的算数平均值，计算rsd(相对标准偏差)。3个平行测定的荧光值rsd应≤3％，有时其中一个数值偏差大，导致rsd》3％，应适当选取另两个平行测定的算数平均值作为检测结果，而后计算抑制率。
[0067]
抑制率(ir)的计算公式：
[0068]
ir(％)＝[1-(rfu
抑制组-rfu
空白组
)：rfu
阴性对照组
)]
×
100％。
[0069]
1.2.4结果与讨论
[0070]
表2体外非酶糖基化抑制结果(抑制率单位：％)
[0071][0072]
如上表2所示，在所测浓度范围内，白花羊蹄甲提取物与体外非酶糖基化抑制作用成正相相关性，白花羊蹄甲提取物浓度越高，其体外非酶糖基化抑制率越高。
[0073]
在浓度1000μg/ml作用下，白花羊蹄甲提取物表现出78.62％的抑制率，比阳性对照物氨基胍略低；在质量浓度为500μg/ml时，白花羊蹄甲提取物的体外非酶糖基化抑制率
为74.22％，与阳性对照物氨基胍约持平；在质量浓度为250μg/ml、125μg/ml的情况下，白花羊蹄甲提取物的体外非酶糖基化抑制率均远高于同等浓度下的氨基胍的抑制率，这说明白花羊蹄甲提取物可在较低浓度下实现抗糖化功效。
[0074]
本领域的普通技术人员可以理解，上述各实施方式是实现本发明的具体实施例，而在实际应用中，可以在形式上和细节上对其作各种改变，而不偏离本发明的精神和范围。