lncRNAPCAT19基因在制备治疗肺癌的药物中的应用的制作方法

lncrnapcat19基因在制备治疗肺癌的药物中的应用
技术领域
1.本发明涉及医药技术领域，尤其涉及lncrna pcat19基因在制备治疗肺癌的药物中的应用。


背景技术：

2.肺癌是世界上发病率和死亡率最高的最常见的恶性肿瘤。目前，早期肺癌的治疗多以手术、放化疗、中药等多种综合治疗为主。肺癌的治疗虽然取得了一定的成果，但患者的5年生存率并无明显改善，肺癌死亡率仍居全球癌症死亡之首。随着分子生物学研究的不断深入，人们发现肺癌的发生是由细胞异常增殖、分化和凋亡引起的，而这些异常生物学行为与体内分子异常表达、激活和突变有关。全面发现并进一步探索这些相关分子的功能和调控机制，可以从根本上了解肺癌的分子机制，为肺癌的治疗提供更有效的靶点。
3.长链非编码rnas(lncrnas)在基因表达调控中发挥重要作用，其异常表达与多种疾病相关，可作为原癌基因或抑癌基因参与肿瘤的发生发展。越来越多的学者发现调控基因表达成为治疗癌症的可行途径。研究发现pcat19在前列腺癌和喉癌中具有致癌作用，但其在肺癌中的应用较少，更没有对于抑制肺癌恶性进展的应用。


技术实现要素：

4.鉴于背景技术存在的不足，本发明涉及lncrna pcat19基因在制备治疗肺癌的药物中的应用，通过生物信息学预测网站发现pcat19在11种癌症中低表达，尤其是在肺癌组织中对于抑制肺癌恶性进展的应用。
5.本发明提供了lncrna pcat19基因在制备治疗肺癌的药物中的应用。
6.进一步的，所述药物包含能够增强lncrna pcat19表达的过表达质粒或小分子化合物。
7.进一步的，所述的lncrna pcat19是一种长链非编码rna，位于19号染色体上。
8.本发明还提供了lncrna pcat19过表达通过抑制肺癌细胞增殖的应用。
9.本发明还提供了lncrna pcat19过表达通过诱导细胞凋亡的应用。
10.本发明还提供了lncrna pcat19过表达通过细胞周期阻滞的应用。
11.本发明的主要有益效果：1、本发明利用pcat19过表达质粒增强了肺癌细胞中pcat19的表达水平；2、pcat19过表达的肺癌细胞增殖能力降低、凋亡能力大大增强、细胞周期被阻滞；3、本发明为肺癌的临床治疗提供了新的靶点，具有显著的临床应用前景。
附图说明
12.图1：评估pcat19过表达质粒对肺癌细胞中pcat19的表达的影响。**p《0.001 vs.nc（阴性对照）组。
13.图2：评估pcat19过表达对肺癌细胞增殖的影响。**p《0.001 vs.nc组。
14.图3：评估pcat19过表达对肺癌细胞凋亡的影响。**p《0.001 vs.nc组。
15.图4：pcat19过表达对异种移植小鼠肿瘤生长的影响。*p《0.05，**p《0.001 vs.nc 组。
具体实施方式
16.以下将结合本发明的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整的描述和讨论，显然，这里所描述的仅仅是本发明的一部分实例，并不是全部的实例，基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明的保护范围。
17.为了便于对本发明实施例的理解，下面将结合附图以具体实施例为例作进一步的解释说明，且各个实施例不构成对本发明实施例的限定。
18.本发明的实施例1，涉及pcat19过表达质粒对肺癌细胞中pcat19的表达的影响，实验方法如下：a549和sk-mes-1肺癌细胞用含10%胎牛血清的rpmi-1640于37℃、5% co2的培养箱中培养。细胞融合到80-90%后，pcat19过表达质粒及阴性对照（nc）利用lipofectamine2000进行转染细胞。用trizol试剂提取细胞总rna，用nanodrop检测rna浓度。 使用 superscript ii 第一链 cdna 合成系统将总 rna 转化为 cdna。定量逆转录聚合酶链反应 (rt-pcr)被用于检测pcat19的表达。
19.如图1所示，pcat19过表达质粒增强了肺癌细胞中pcat19的表达水平。
20.本发明的实施例2，涉及pcat19过表达对肺癌细胞增殖的影响，实验方法如下：pcat19过表达质粒及阴性对照（nc）利用lipofectamine2000进行转染a549和sk-mes-1细胞。利用克隆形成实验检测细胞增殖。将细胞消化并在12孔板中以每孔100个细胞在37℃和5% co2中培养3周。停止培养后，每孔加入甲醇固定15分钟，加入 giemsa 染色30 分钟。计算集落形成率：集落形成率=（集落数/接种细胞数）
×
100%。
21.如图2所示，pcat19过表达抑制了肺癌细胞的增殖。
22.本发明的实施例3，涉及pcat19过表达对肺癌细胞凋亡的影响，实验方法如下：pcat19过表达质粒及nc利用lipofectamine2000进行转染a549和sk-mes-1细胞。细胞重悬于1
×
annexin结合缓冲液中。5 μl异硫氰酸荧光素（fitc）annexin v和1 μl碘化丙啶（pi）溶液，300 μl 1
×
annexin binding buffer加入细胞悬液，室温孵育15分钟。最后，通过流式细胞术分析染色的细胞。
23.如图3所示，pcat19过表达促进了肺癌细胞的凋亡。
24.本发明的实施例4，涉及pcat19过表达对异种移植小鼠肿瘤生长的影响，实验方法如下：利用a549肺癌细胞建立裸鼠荷瘤模型，实验已获得伦理许可。16只无胸腺裸鼠（spf，6周龄，20
±
2g，雄性）保持在spf条件下。小鼠被随机分为两组：nc组（n=8）； pcat19 组 (n=8)。 nc组：将转染nc的a549细胞皮下注射到每只小鼠的右侧。pcat19组：将转染pcat19的a549细胞皮下注射到每只小鼠的右侧。每3天用游标卡尺测量小鼠的短径和长径。所有小鼠均饲喂27天，实验终止。所有小鼠被安乐死，并称重每只小鼠的肿瘤。收集两组小鼠的肿瘤组织进行免疫组化和tunel以检测增殖标志物ki-67水平和细胞凋亡情况。
25.如图4所示，pcat19过表达抑制了肿瘤生长，降低了ki-67表达，并促进了凋亡。
26.最后应说明的是：以上所述实施例，仅为本发明的具体实施方式，用以说明本发明技术方案，而非对其限制，本发明的保护范围并不局限于此，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，其依然可以对前述实施例所记载的技术方案进行修改或可轻易想到变化，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改、变化或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明实施例技术方案的精神和范围，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应所述以权利要求的保护范围为准。

技术特征：
1.lncrnapcat19基因在制备治疗肺癌的药物中的应用。2.根据权利要求1所述的lncrnapcat19基因在制备治疗肺癌的药物中的应用，其特征在于：所述药物包含能够增强lncrnapcat19表达的过表达质粒或小分子化合物。3.根据权利要求2所述的lncrnapcat19基因在制备治疗肺癌的药物中的应用，其特征在于：所述的lncrnapcat19是一种长链非编码rna，位于19号染色体上。4.lncrnapcat19过表达通过抑制肺癌细胞增殖的应用。5.lncrnapcat19过表达通过诱导细胞凋亡的应用。6.lncrnapcat19过表达通过细胞周期阻滞的应用。

技术总结
本发明涉及医药技术领域，尤其涉及lncRNA PCAT19基因在制备治疗肺癌的药物中的应用，通过生物信息学预测网站发现PCAT19在11种癌症中低表达，尤其是在肺癌组织中对于抑制肺癌恶性进展的应用，本发明利用PCAT19过表达质粒增强了肺癌细胞中PCAT19的表达水平；PCAT19过表达的肺癌细胞增殖能力降低、凋亡能力大大增强、细胞周期被阻滞；本发明为肺癌的临床治疗提供了新的靶点，具有显著的临床应用前景。具有显著的临床应用前景。具有显著的临床应用前景。


技术研发人员：曹卓 潘炯伟 叶再挺 蔡晓平 尹章勇 徐存来
受保护的技术使用者：浙江百越生物技术有限公司
技术研发日：2022.02.21
技术公布日：2022/5/25