偶联IL-1β单克隆抗体的纳米硅球及应用的制作方法

偶联il-1
β
单克隆抗体的纳米硅球及应用
技术领域
1.本发明属于纳米材料制备及生物诊断技术领域，具体涉及一种偶联il-1β单克隆抗体的纳米硅球及应用。


背景技术：

2.均相光激化学发光免疫分析技术(amplified luminescent proximity homogeneous assaylinked immunosorbent assay,alphalisa)是以生物分子间相互作用为原理，荧光共振能量转移发光为基础，硅胶微球为载体，时间分辨荧光为检测模式的免疫学研究技术。该技术起源于 1994年研究发现的单线态氧分子能量传递发光原理，并据此建立的光激化学发光技术，光敏剂经激发光照射产生单线态氧，发光剂接受单线态氧能量传递产生荧光。1999年，这一技术经perkin elmer公司改进，将光敏剂、发光剂包被于涂布有亲和涂层的硅胶微球表面，以此种微球作为免疫吸附的载体进行免疫学分析，从而诞生了alphalisa技术。均相光激化学发光免疫分析技术具有免洗涤、易于自动化和机械化的操作优势，以高特异性、高灵敏度和高通量的技术特点，成为近几年免疫研究分析的热点，是现在及未来分析检测技术的发展趋势，能够广泛应用于生物医学研究和疾病诊断。
3.alphalisa采用表面化学处理硅胶微球，供体微球和受体微球表面包被有亲和涂层，常见的有亲和素、链亲和素、protein a、protein g等，可以结合待测生物分子。分子间相互作用会将供体和受体微球拉近至单线态氧扩散范围(200nm)以内，从而激发级联放大的化学发光反应。上述化学发光反应的发光原理为光激化学发光，供体微球表面可以涂布光敏剂苯二甲蓝，受体微球表面涂布发光剂二甲噻吩衍生物并鳌合有稀土原子铕，当用680nm的激光照射时，供体微球表面光敏剂分解环境中的氧，形成单体氧分子(氧自由基)，单体氧分子扩散到受体微球，将能量最终传递给稀土原子铕，激发波长为615nm、半衰期为0.3s的激发光，可以采用荧光扫描仪检测。
4.但是由于alphalisa技术还存在一些技术难点，比如需求形貌均一、性质稳定的可用于抗体偶联的纳米微球的生产、纳米微球与抗体如何更好的偶联，所以，该技术更好的实施还需要一种形貌均一、性质稳定的可用于抗体偶联的纳米微球是解决问题的重点。


技术实现要素：

5.针对现有技术中存在不足，本发明提供了一种偶联il-1β单克隆抗体的纳米硅球及应用。在本发明中，制备了一种呈均匀的球状、有很规整的直通孔道结构的纳米硅球；所述纳米硅球修饰有修饰剂，其能够与il-1β单克隆抗体偶联得到抗体-纳米硅球，该抗体-纳米硅球能够用于检测il-1β蛋白抗原。
6.本发明中首先提供了一种il-1β单克隆抗体，所述il-1β单克隆抗体包括ab2或ab3。
7.进一步的，所述ab2的重链可变区氨基酸序列如seq id no:1所示，其轻链可变区序列氨基酸序列如seq id no:2所示；
8.所述ab3的重链可变区氨基酸序列如seq id no:3所示，其轻链可变区序列氨基酸序列如seq id no:4所示。
9.进一步的，所述il-1β单克隆抗体的制备方法为：
10.用il-1β蛋白片段免疫balb/c小鼠，再将免疫成功小鼠的脾脏淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，通过筛选阳性克隆得到特异性分泌抗il-1β单克隆抗体杂交瘤细胞株，将该细胞接种于提前用液体石蜡致敏的balb/c小鼠腹腔，大量生产抗il-1β单克隆抗体，并通过蛋白纯化的方式制备得到高纯度的抗il-1β单克隆抗体；所述蛋白免疫为经过三次蛋白免疫；所述骨髓瘤细胞为sp2/0骨髓瘤细胞。
11.本发明中还提供了一种偶联il-1β单克隆抗体的纳米硅球，所述偶联il-1β单克隆抗体的纳米硅球由上述il-1β单克隆抗体和纳米硅球偶联得到。
12.进一步的，所述il-1β单克隆抗体为ab2和ab3。
13.本发明中还提供了上述偶联il-1β单克隆抗体的纳米硅球在检测il-1β蛋白抗原中的应用。
14.本发明中还提供了上述偶联il-1β单克隆抗体的纳米硅球在制备检测il-1β蛋白抗原试剂中的应用。
15.本发明中还提供了上述偶联il-1β单克隆抗体的纳米硅球在制备抗il-1β的生物诊断试剂中的应用。
16.本发明中还提供了一种用于偶联il-1β单克隆抗体的纳米硅球，所述纳米硅球由修饰剂修饰sio
2-cooh微球得到，其呈均匀的球状，有很规整的直通孔道结构；
17.所述修饰的修饰剂包括a、c或b、c：
18.(a)n,n-二甲基-4-(3-苯基-5,6-二氢-1,4-二恶英-2-基)苯胺、eu(tta)3、三辛基氧化膦；
19.(b)n,n-二甲基-4-(2-苯基-5,6-二氢-1,4-氧硫辛-3-基)苯胺、eu(tta)3、1,10-菲罗啉；
20.(c)叶绿素a和(z)-4-(4-(二丁基-l4-氮杂亚基)-2-羟环己基-2,5-二烯-1-亚基)-2-(4
‑ꢀ
(二丁胺基)-2-羟基苯基)-3-氧代环丁基-1-烯-1-甲酸酯。
21.进一步的，所述sio
2-cooh微球的制备方法包括如下步骤：
22.将干燥后的sio2与无水甲苯混合均匀后升温，加入3-氨丙基三乙氧基硅烷(aptes)，氮气保护下回流，离心，洗涤，干燥，得到nh
2-sio2微球；
23.将nh
2-sio2微球分散在n，n-二甲基甲酰胺dmf溶剂中，80℃搅拌1-4h，然后在剧烈搅拌条件下加入含琥珀酸酐的dmf溶液并搅拌反应8-24h，反应结束后洗涤，得到纳米硅球，记为sio
2-cooh微球。
24.与现有技术相比，本发明的有益效果在于：
25.本发明利用il-1β蛋白片段作为免疫原免疫balb/c小鼠，利用细胞融合技术将免疫成功的小鼠脾脏淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞相融合筛选能够稳定分泌抗il-1β单克隆抗体的杂交瘤细胞株，大量生产il-1β单克隆抗体，经纯化后获得高纯度的抗il-1β单克隆抗体，获得的抗il-1β单克隆抗体效价高、特异性好，可直接应用于分子免疫学研究，或制成多种体外诊断试剂盒用于检测il-1β抗原的免疫检测工具中。可用于制备抗il-1β的生物诊断试剂的研究与开发。
26.本发明制备了稳定均一的纳米硅球，提供的抗il-1β单克隆抗体能够特异性的结合il-1β蛋白，减少了可能的交叉反应，特异性高。包含本发明所述抗il-1β单克隆抗体的检测工具可以用于该蛋白的检测。本发明的最低检测限(ldl)为15.31pg/ml，定量下限(lloq) 为57.24pg/ml，半数最大效应浓度(ec50)为95.67ng/ml，检测范围(dynamic range) 10-1,000,000pg/ml，比其它技术的有所提高和改进。
27.本发明中，通过将纳米硅球与il-1β单克隆抗体偶联，然后将其用于alphalisa检测il-1β抗原，所述检测方法术具有高度的敏感性、均一性和宽泛的检测范围，操作简便，样本需求量低，减少了总检测时间；同时，它有效回避了样品荧光干扰，对待测样本质量需求低，易于优化检测体系，真正实现了检测的均一性。
附图说明
28.图1是纯化后的il-1β单克隆抗体组分收集的sds-page电泳图。
29.图2是不同稀释度il-1β单克隆抗体ab2和ab3的免疫效价检测结果。
30.图3是il-1β单克隆抗体ab2和ab3的特异性及交叉反应鉴定结果。
31.图4是il-1β的检测结果图。
具体实施方式
32.本发明公开了一种偶联特异性il-1β抗体的纳米硅球制备和应用，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。以下实施案例中的方法、设备、材料，如果未进行特别说明，均为本领域常规方法、设备和材料，均可由市场购得。
33.实施例1：纳米硅球的制备
34.将1g sio2在110℃下真空干燥过夜，加50ml无水甲苯使溶液充分混合均匀，然后匀速升温至115℃，接着加入1.6ml 3-氨丙基三乙氧基硅烷(aptes)，在氮气保护下回流24h，离心，无水乙醇洗涤3-4次，于80℃烘箱中干燥，得到nh
2-sio2微球。
35.将nh
2-sio2微球(0.5g)分散在n，n-二甲基甲酰胺(dmf)溶剂中，80℃搅拌2h。然后在剧烈搅拌条件下将1g琥珀酸酐(溶于dmf)与上述溶液混合，搅拌12h后通过乙醇和去离子水纯化，冷冻干燥，得到纳米硅球，记为sio
2-cooh微球。
36.本实施例中将制备得到的sio
2-cooh微球用扫描电子显微镜表征羧基修饰后的纳米硅球sio
2-cooh微球，合成的介孔二氧化硅呈均匀的球状结构，有很规整的直通孔道结构。
37.本实施例中还用修饰剂修饰sio
2-cooh微球制备得到纳米硅球，修饰步骤如下所示：
38.将sio
2-cooh微球加入到a或b中得到混合体系，其中，a为：含3.3mm化合物n,n
‑ꢀ
二甲基-4-(3-苯基-5,6-二氢-1,4-二恶英-2-基)苯胺、15.5mm eu(tta)3和20mm三辛基氧化膦(topo)的混合物；
39.b为：含3.3mm n,n-二甲基-4-(2-苯基-5,6-二氢-1,4-氧硫辛-3-基)苯胺、15.5mmeu(tta)3和15.5mm 1,10-菲罗啉(phen)。
40.然后将上述混合体系在8:1:1(体积比)乙二醇/苯甲醇/水中搅拌8-10分钟。用等量的乙醇稀释颗粒，离心，用水冲洗，并进行超声处理，得到化学发光粒子，记为a/eu(tta)3/topo 或b/eu(tta)3/phen。
41.将上述得到的化学发光粒子加入到含有10mm叶绿素a(chl)和10mm(z)-4-(4-(二丁基-l4-氮杂亚基)-2-羟环己基-2,5-二烯-1-亚基)-2-(4-(二丁胺基)-2-羟基苯基)-3-氧代环丁基-1-烯-1-甲酸酯(c)的混合溶液中得到混合体系，然后将混合体系在8:1:1(体积比) 乙二醇/苯甲醇/水中搅拌8-10分钟。用等量的乙醇稀释颗粒，离心，用水冲洗，并进行超声处理，得到所述纳米硅球。
42.将上述制备得到的纳米硅球用扫描电子显微镜表征，在基团修饰之后，硅球的形貌和孔道结构保持良好，这是由于加入的试剂以si-o-si键的形式与硅球结合，未对样品造成损伤。
43.实施例2：il-1β单克隆抗体制备
44.(1)重组il-1β蛋白片段的表达与纯化：
45.重组质粒pet-30a-il-1β(购自addgene公司)，采用42℃热激90s的方法将重组质粒转化进大肠杆菌bl21(上海生工)，挑取卡那霉素抗性的菌斑，在500ml lb培养基(上海生工)中培养至当菌液的od为0.6～0.8时，加入0.5mm iptg诱导目标蛋白的表达，25℃恒温培养12h后，收集菌体，超声破菌，离心收集上清。
46.将菌体裂解液上清加入镍柱(购自thermo fisher scientific)进行纯化蛋白，用500mm 咪唑缓冲液洗脱重组蛋白，然后用sds-page电泳检测重组蛋白的表达。
47.图1是重组蛋白il-1β组分收集的sds-page电泳图；如图1所示，il-1β蛋白经一次洗脱即能获得较高的纯度，收集洗脱后的蛋白，冻干后进行后续动物免疫。
48.(2)balb/c小鼠的免疫与效价检测：
49.本实施例所用balb/c小鼠购自南京大学动物模式研究所。按常规方法进行小鼠免疫(参考北京大学出版社出版的《现代抗体技术及其应用》和科学出版社的《抗体制备与使用实验指南》)。用间接elisa法检测免疫后小鼠血清效价，具体操作步骤如下所示。
50.取步骤(1)中制备得到的重组il-1β蛋白，用ph 9.6，0.05mol/l的碳酸盐缓冲液将il-1β蛋白稀释为1μg/ml后加入96孔酶标板，每孔100μl，4℃包被过夜，取出包被过夜的酶标板，tbs-t缓冲液洗涤3次后，拍干酶标板，4℃贮存待用。
51.第二次免疫后1周，从小鼠尾静脉适量采血，5000g离心15min分离血清，用样本稀释液(含有0.5％牛血清白蛋白的磷酸盐缓冲液)将血清按1:100、1:1000、1:10000、1:100000、 1:1000000梯度进行稀释，每孔100μl加入待检测酶标板，37℃，孵育1h后，经tbs-t缓冲液洗涤3次，拍干酶标板，每孔加入100μl 1:5000稀释后的hrp标记的山羊抗小鼠二抗(购自jackson immuno research公司)，37℃孵育30min。取出酶标板，经tbs-t缓冲液洗涤5 次后，每孔加入100μl tmb底物显示液，37℃避光显色10～15min，随后加入50μl终止液，于酶标仪450nm波长下读取吸光值。选取血清效价达到1：105以上小鼠，进行第三次免疫。
52.(3)杂交瘤细胞的融合、筛选：
53.制备饲养层细胞，准备sp2/0骨髓瘤细胞，免疫结束后3～4天后取小鼠脾脏细胞进
行细胞融合，然后将融合后的细胞铺板(6块96孔板)，利用间接elisa法筛选生产单克隆抗体的杂交瘤细胞，经过两轮亚克隆筛选得到抗体分泌性最好的杂交瘤细胞株。
54.(4)抗il-1β单克隆抗体的生产及纯化：
55.按常规方法制备小鼠单克隆抗体腹水，利用正辛酸-蛋白g法对腹水抗体进行纯化，抗体纯度经sds-page电泳验证，如图2所示，抗体经洗脱后能获得较高的纯度，抗il-1β单克隆抗体igg(h l)分子量约为160kd，其中igg重链约为55kd，igg轻链约为25kd。
56.实施例3：il-1β单克隆抗体效价测定及特异性
57.(1)单克隆抗体的效价测定：
58.用ph 9.6，0.05mol/l的碳酸盐缓冲液将il-1β蛋白稀释为1μg/ml，包被酶标板，100μl/ 孔，4℃过夜；用样本稀释液(含有0.5％牛血清白蛋白的磷酸盐缓冲液)将以上单克隆抗体按1:103、1:104、1：105、1：106、1：107稀释，100μl/孔，37℃孵育1h；取出酶标板，经 tbs-t洗涤3次，拍干酶标板，每孔加入100μl 1:5000稀释的hrp标记的山羊抗小鼠二抗，37℃孵育30min；经tbs-t洗涤5次后，每孔加入100μl加入tmb底物显示液，37℃避光显色10～15min，随后加入50μl终止液终止反应，于酶标仪450nm波长下读取吸光值。
59.图2是不同稀释度il-1β单克隆抗体的免疫效价检测结果图；如图2所示，纯化后的单克隆抗体的效价均达到1
×
106。
60.(2)单克隆抗体特异性识别及交叉反应鉴定：
61.用将碳酸盐缓冲液将hsp90、hb-egf、egfr、tnf-α、il-1β、hgf蛋白稀释为1μg/ml，包被酶标板，并设置空白对照，空白对照组为1μg/ml bsa蛋白，用il-1β单克隆抗体进行间接法elisa检测。
62.图3是il-1β单克隆抗体的特异性及交叉反应鉴定结果；如图3所示，il-1β单克隆抗体与hsp90、hb-egf、egfr、tnf-α、il-1β、hgf蛋白之间均无交叉反应，表明该抗体的特异性较好。
63.实施例4：il-1β单克隆抗体重轻链可变区的测序及鉴定
64.单克隆细胞长期保存，可能由于多次传代后不稳定及污染问题导致阳性克隆丢失，为解决上述问题，本发明利用分子生物学技术，对阳性单克隆细胞株利用mouse ig-primer set试剂盒(millipore)进行重链可变区(mvh)和轻链可变区(mvl)基因扩增，并进行序列鉴定。
65.通过鉴定发现，扩增得到的序列为ab2和ab3，其中ab2的重链可变区氨基酸序列为 seq id no:1所示，即：
66.ldvqvqqsgaelarpgasvklsckasgytfithwmqwvkqrpgqglewigtiypgd gdtrytqkfkgkatltadkssstaymqlsslasedsavyycasydedlpfaywgqgtlvtv sa；ab2的轻链可变区序列氨基酸序列为seq id no:2所示，即：
67.tqspssmyaslgervtitckapqdirrylswfqqkpgkspktliyranrlvdgvpsrfs gsgsgqdysltissleyedmgiyyclqrdeapftfgsgtkleik；
68.ab3的重链可变区氨基酸序列为seq id no:3所示，即：
69.qiqaqesgpglvkpsqslsltcagrpfwilakggwnwirqfpgnklewmgaltqilgn gklfplknrisitrdtsknqfflklnsvtpedtatyfcarsragqsfywgqgtsvivssa； ab3的轻链可变区氨基酸序列为seq id no:4所示，即：
70.tqtplslpvslgdqasiscglfqradilnkagqaiwflqkpgqspklliflkgaqfrgv pdrfsgsesgtdftlkisrveaedlgvyfcyqadlvlepfgagtklelkr。
71.实施例5：偶联il-1β单克隆抗体的纳米硅球的制备
72.在1.5ml的ep试中，清洗纳米硅球，以15000
×
g离心15分钟，丢弃上清液，备用；制备新鲜的400mm nabh3cn水溶液，备用。
73.在含1mg纳米硅球的ep管中，添加10μl 400mm nabh3cn水溶液、10mg/ml il-1β单克隆抗体、1.25μl 10％tween-20和100mm hepes(ph 7.4)，最终总体积200μl。然后将ep管在37℃下，旋转振动(6
–
10rpm)反应24小时。接着，向ep管中添加10μl 65mg/ml 的新鲜羧甲氧基胺溶液，旋转振动(6
–
10rpm)37℃下反应1小时。反应结束后，在4℃以 16000
×
g离心15分钟，除去上清液，重新悬浮纳米硅球，进行短暂的超声处理(10个1秒的短脉冲)，重复两次后，将纳米硅球以5mg/ml的浓度悬浮在储存缓冲液中(200μl of pbs 0.05％proclin-300作为防腐剂)，得到偶联il-1β单克隆抗体的纳米硅球，记为抗体-纳米硅球，储存在4℃的不透明ep管中备用。其中，il-1β单克隆抗体分别为ab2和ab3，将上述方法制备得到的抗体-纳米硅球记为bead-ab2、bead-ab3。
74.实施例6：抗体配对反应
75.本实施例中首先将抗体ab2和ab3生物素化，用于进行抗体配对反应。其中，抗体生物素化的具体步骤为：
76.将5mg il-1β单克隆抗体溶解在0.5ml pbs中，然后加入新鲜制备的10mm生物素试剂溶液(将2.3mg nhs-lc-生物素(琥珀酰亚胺-6-(生物酰胺)己酸酯，生工)溶解在500μl dmso中)，在冰上培养反应2小时，得到生物素化后的抗体，分别为记biotin-ab2、biotin-ab3。
77.将上述生物素化后的抗体biotin-ab2、biotin-ab3与来自于实施例5的抗体-纳米硅球 bead-ab2、bead-ab3进行抗体配对反应，所述反应步骤为：分别将浓度为3、1、0.3、0.1μg/ml 的bead-ab2、bead-ab3与浓度为3、1、0.3、0.1μg/ml的biotin-ab2、biotin-ab3组合，探讨其在il-1β浓度变化(0～1000μl)时的吸收度情况，来选出最合适的抗体对。
78.通过上述试验，发现浓度为0.3μg/ml的biotin-ab2与浓度为1μg/ml的bead-ab3组合在在il-1β浓度变化时(0-400pg/ul)，吸收度呈线性变化(r2＝0.998)，且在各种组合中最高。) 所述0.3μg/ml的biotin-ab2与1μg/ml的bead-ab3的配对结果如表1所示。
79.表1. 0.3μg/ml的biotin-ab2与1μg/ml的bead-ab3的配对结果
[0080][0081][0082]
实施例7：il-1β检测
[0083]
在384孔板中加5μl在分析缓冲液(购自铂金埃尔莫)中稀释的il-1β，准备20μl抗体混合物(终浓度为0.3μg/ml的biotin-ab2与1μg/ml的bead-ab3)，在25℃下培养1小时，然
后添加终浓度为40μg/ml的25μl链霉亲和素供体珠溶液(购自铂金埃尔莫)，然后在25℃的黑暗中反应30分钟后，用synergy多功能荧光仪(biotek)读数，读数结果如图4所示。
[0084]
经计算，最低检测限(ldl)为15.31pg/ml，定量下限(lloq)为57.24pg/ml，半数最大效应浓度(ec
50
)为95.67ng/ml，检测范围(dynamic range)为10-1,000,000pg/ml，比其它技术的有所提高和改进。
[0085]
所述实施例为本发明的优选的实施方式，但本发明并不限于上述实施方式，在不背离本发明的实质内容的情况下，本领域技术人员能够做出的任何显而易见的改进、替换或变型均属于本发明的保护范围。

技术特征：
1.一种il-1β单克隆抗体，其特征在于，所述il-1β单克隆抗体包括ab2或ab3。2.根据权利要求1所述的il-1β单克隆抗体，其特征在于，所述ab2的重链可变区氨基酸序列如seq id no:1所示，其轻链可变区序列氨基酸序列如seq id no:2所示；所述ab3的重链可变区氨基酸序列如seq id no:3所示，其轻链可变区序列氨基酸序列如seq id no:4所示。3.根据权利要求1所述的il-1β单克隆抗体，其特征在于，所述il-1β单克隆抗体的制备方法为：用il-1β蛋白片段免疫balb/c小鼠，再将免疫成功小鼠的脾脏淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，通过筛选阳性克隆得到特异性分泌il-1β单克隆抗体杂交瘤细胞株，然后将il-1β单克隆抗体杂交瘤细胞株接种于提前用液体石蜡致敏的balb/c小鼠腹腔，得到所述il-1β单克隆抗体。4.一种偶联il-1β单克隆抗体的纳米硅球，其特征在于，所述偶联il-1β单克隆抗体的纳米硅球由权利要求1所述的il-1β单克隆抗体与纳米硅球偶联得到。5.根据权利要求4所述的偶联il-1β单克隆抗体的纳米硅球，其特征在于，所述il-1β单克隆抗体为ab2和ab3。6.权利要求4所述的偶联il-1β单克隆抗体的纳米硅球在检测il-1β蛋白抗原中的应用。7.权利要求4所述的偶联il-1β单克隆抗体的纳米硅球在制备检测il-1β蛋白抗原试剂中的应用。8.权利要求4所述的偶联il-1β单克隆抗体的纳米硅球在制备抗il-1β的生物诊断试剂中的应用。9.一种用于偶联il-1β单克隆抗体的纳米硅球，其特征在于，所述纳米硅球由修饰剂修饰sio
2-cooh微球得到，其呈均匀的球状，有很规整的直通孔道结构；所述修饰剂包括如下所述的a、c或b、c：（a）n,n-二甲基-4-（3-苯基-5,6-二氢-1,4-二恶英-2-基）苯胺、eu(tta)3、三辛基氧化膦；（b）n,n-二甲基-4-（2-苯基-5,6-二氢-1,4-氧硫辛-3-基）苯胺、eu(tta)3、1,10-菲罗啉；（c）叶绿素a和(z)-4-（4-（二丁基-l4-氮杂亚基）-2-羟环己基-2,5-二烯-1-亚基）-2-（4-（二丁胺基）-2-羟基苯基）-3-氧代环丁基-1-烯-1-甲酸酯。10.根据权利要求9所述的用于偶联il-1β单克隆抗体的纳米硅球，其特征在于，所述sio
2-cooh微球的制备方法为：将干燥后的sio2与无水甲苯混合均匀后升温，加入3-氨丙基三乙氧基硅烷aptes，氮气保护下回流，离心，洗涤，干燥，得到nh
2-sio2微球；将nh
2-sio2微球分散在n，n-二甲基甲酰胺dmf溶剂中搅拌反应，然后在剧烈搅拌条件下加入含琥珀酸酐的dmf溶液并搅拌反应，然后通过乙醇和去离子水纯化，得到sio
2-cooh微球。

技术总结
本发明提供了一种偶联IL-1β单克隆抗体的纳米硅球及应用，属于纳米材料制备及生物诊断技术领域；在本发明中，合成了一种呈均匀的球状、有很规整的直通孔道结构的纳米硅球；所述纳米硅球能够与抗IL-1β单克隆抗体偶联得到抗体-纳米硅球，该抗体-纳米硅球能够用于检测IL-1β蛋白抗原，其最低检测限(LDL)为15.31pg/mL，定量下限(LLOQ)为57.24pg/mL，半数最大效应浓度(EC50)为95.67ng/mL，检测范围(Dynamic range)10-1,000,000pg/mL。1,000,000pg/mL。1,000,000pg/mL。


技术研发人员：刘晗青 屠志刚
受保护的技术使用者：江苏莱森生物科技研究院有限公司
技术研发日：2021.11.11
技术公布日：2022/5/25