一种用于治疗脊髓损伤和修复的药物组合物及其应用

1.本发明涉及生物医药领域，具体地，本发明涉及一种用于治疗脊髓损伤和修复的药物组合物及其应用。


背景技术：

2.脊髓损伤（sci）可导致永久性的脊髓功能障碍，严重影响患者生活质量。sci发生后功能障碍的主要原因是直接的机械损伤导致神经元受损，以及随后发生继发损伤，包括炎症反应，氧化应激反应和兴奋性损伤等，从而使神经元轴突受损以及胶质细胞增生，最终导致神经元细胞死亡。sci导致的神经功能障碍是永久性的，因为脊髓组织受损后，轴突再生能力受到抑制，难以通过损伤区域，从而不可逆地损伤运动和感觉信息的传递。因此，促进受损神经元轴突再生可以重建神经通路，从而有望改善脊髓损伤导致的神经功能障碍。
3.rab蛋白是小分子gtp结合家族（small gtp-binding proteins）家族中最大的亚家族，与其他gtp酶类似，其通过调节gtp和gdp之间的转换介导细胞内各种生理活动。rab在调节神经元轴突转运，膜运输和维持突触功能中发挥重要作用。rab与许多中枢神经系统疾病密切相关。胆碱能基底前脑（cbf）神经元中多种rab蛋白家族成员表达量的上调可能导致认知功能障碍 （nci）。rab39b的突变使未成熟glua2水平升高，导致缺乏该亚基的 ampa 受体的形成，从而改变神经元突触功能。rab11活性的缺乏导致神经元生功能受损参与亨廷顿病（hd）的发生。wdr13的缺失使rab3a上调，导致海马神经元树突棘密度增加。而rab3a是否能够影响脊髓损伤修复过程目前尚不清楚，对其作用机制更是一片空白。


技术实现要素：

4.本发明的目的在于解决现有技术中脊髓损伤修复治疗过程中所存的技术问题，从而提供了一种新的脊髓损伤修复治疗靶点，对rab3a在脊髓损伤修复过程中的功能及作用机制进行了深入研究，揭示了rab3a在脊髓损伤修复治疗中的关键作用，为脊髓损伤的临床治疗提供了切实的理论依据和方向。
5.为了解决上述技术问题，本发明是通过如下技术方案得以实现的。
6.本发明的第一方面提供了一种用于治疗脊髓损伤和修复的药物组合物，包括rab3a抑制剂和spastin蛋白或其活性片段。
7.作为优选地，所述rab3a抑制剂选自基于rab3a基因设计的sirna（sirab3a）。
8.作为优选地，所述基于rab3a基因设计的sirna序列如seq id no：1所示。
9.作为优选地，所述spastin蛋白序列如seq id no：2所示。
10.作为优选地，所述脊髓损伤为急性脊髓损伤。
11.本发明第二方面提供了rab3a抑制剂在制备治疗脊髓损伤和修复的药物中的应用。
12.作为优选地，所述rab3a抑制剂选自基于rab3a基因设计的sirna（sirab3a）。
13.作为优选地，所述基于rab3a基因设计的sirna序列如seq id no：1所示。
14.作为优选地，所述脊髓损伤为急性脊髓损伤。
15.本发明第三方面提供了一种用于检测脊髓损伤和修复的试剂盒，包括检测rab3a蛋白或其活性片段的第一特异性引物，和/或检测spastin蛋白或其活性片段的第二特异性引物。
16.作为优选地，所述第一特异性引物正向序列如seq id no：3所示，反向序列如seq id no：4所示。
17.作为优选地，所述第二特异性引物正向序列如seq id no：5所示，反向序列如seq id no：6所示。
18.本发明第四方面提供了一种筛选用于治疗脊髓损伤和修复的药物的方法，包括如下步骤：（1）将候选药物作用于脊髓损伤动物模型；（2）通过检测脊髓损伤动物模型体内rab3a和/或spastin表达水平，从而获得目标药物；当候选药物使得rab3a表达水平降低和/或使得spastin表达水平增加时，即为目标药物。
19.在无特别说明的情况下，本发明上下文中所提到的“rab3a蛋白”为一种小分子gtp结合蛋白；所提到的rab3a蛋白活性片段是指氨基酸序列长度有些变化，或长或短，但是整体保持rab3a蛋白的活性。所提到的“spastin蛋白”为一种微管切割蛋白；所提到的spastin蛋白活性片段是指氨基酸序列长度有些变化，或长或短，但是整体保持spastin蛋白的活性。
20.术语“第一”、“第二”仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括至少一个该特征。在本发明的描述中，“多个”的含义是至少两个，例如两个，三个等，除非另有明确具体的限定。
21.在先研究发现，spastin作为一种微管切割蛋白，通过将长状的微管切割为较短的微管，调节微管运动和重排。在神经元中过表达spastin可以增强其突起的分支形成，而沉默spastin则会导致神经元轴突的长度减少以及抑制分支形成。spastin发挥功能时，通过带正电荷的识别结构结合微管，将微管拉入中心孔中实现切割微管。spastin切割微管调控微管动态性是神经元轴突生长所必须的。
22.在本发明中，发明人通过大量研究发现rab3a蛋白为脊髓损伤相关蛋白，该蛋白在sci模型中的表达量发生显著的下调，且rab3a与spastin能够直接相互交互。在受损的脊髓组织中，rab3a蛋白和spastin蛋白彼此共定位。这些相互作用表明， rab3a和spastin都可以在微管动力调节中起到重要作用。rab3a和spastin之间的相互作用能够抑制sci损伤，并开始相关的修复过程。从而通过这些蛋白的相互作用，可以采用药物进行干预治疗，来实现sci的修复和治疗。
23.本发明相对于现有技术具有如下技术效果：（1）本发明中采用蛋白质组学方法来鉴定与脊髓损伤修复过程相关的关键蛋白。通过采用lc-ms方法鉴定了能够与gst-spastin相互作用的蛋白质，并使用共免疫沉淀实验和染色方法验证了rab3a与spastin之间的潜在相互作用。
24.（2）本发明发现在神经元中过表达rab3a可抑制突起延伸与侧枝形成；相反，若干
扰rab3a表达可促进神经元突起延伸与侧枝形成。通过用rab3a和spastin共转染cos7细胞，发现rab3a降低了spastin的微管切割能力，同时发现rab3a可能是通过溶酶体途径诱导spastin降解从而影响其功能。
25.（3）本发明通过用rab3a和spastin共转染了海马神经元，发现rab3a可以抑制spastin促进海马神经元突起生长的能力。并通过构建脊髓损伤动物模型、利用免疫荧光染色、蛋白质谱分析和高通量测序等，确定了rab3a参与脊髓损伤及修复过程的具体机制。本发明明确了rab3a为脊髓损伤和修复过程中的关键靶点，在调节神经突生长和分支中发挥作用，为脊髓损伤的临床治疗提供了切实的实验证据和科学依据。
附图说明
26.图1为磷酸钙法将gfp和gfp-rab3a转染原代培养海马神经元48h后免疫荧光染色结果示意图。
27.图2为rab3a对海马神经元细胞轴突和突起长度影响定量统计结果示意图。
28.图3为rab3a对海马神经元细胞轴突和突起数量影响定量统计结果示意图。
29.图4为sirab3a对rab3a表达wb检测结果示意图。
30.图5为gfp和gfp-sirab3a转染原代培养海马神经元48h后免疫荧光染色结果示意图。
31.图6为以典型的rab3a染色为阳性标准，对两个样本中rab3a表达量统计结果示意图。
32.图7为sirab3a对海马神经元细胞轴突和突起长度影响定量统计结果示意图。
33.图8为sirab3a对海马神经元细胞轴突和突起数量影响定量统计结果示意图。
34.图9为rab3a在脊髓损伤与假手术组中的基因转录水平结果示意图。
35.图10为spastin在脊髓损伤与假手术组中的基因转录水平结果示意图。
36.图11为rab3a在脊髓损伤与假手术组中的蛋白表达水平结果示意图。
37.图12为spastin在脊髓损伤与假手术组中的蛋白表达水平。
38.图13为脊髓损伤后rab3a的转录水平与蛋白表达水平的相关性结果示意图。
39.图14为为脊髓损伤与假手术组中大鼠的脊髓组织进行裂解后免疫荧光检测spastin蛋白表达水平结果示意图。
40.图15为脊髓损伤与假手术组中大鼠的脊髓组织进行裂解后用免疫印迹法检测spastin蛋白表达水平结果示意图。
41.图16为纯化gst和gst-spasitn重组蛋白跑胶后进行western blot检测结果示意图。
42.图17为将纯化的gst和gst-spasitn蛋白分别与裂解液和大鼠大脑裂解液进行相互作用后电泳染色结果示意图。
43.图18为与spastin发生相互作用的rab3a肽段，其序列为msesldtadpavtgak。
44.图19为与spastin发生相互作用的rab3a肽段，其序列为lqiwdtagqer。
45.图20为与spastin发生相互作用的rab3a肽段，其序列为lqiwetagqer。
46.图21为spastin抗体作为ip抗体与大鼠大脑裂解进行coip实验结果示意图。
47.图22为rab3a抗体作为ip抗体与大鼠大脑裂解进行coip实验结果示意图。
48.图23为hek293细胞过表达flag-spastin和gfp-rab3a后以flag作为ip抗体进行coip实验结果示意图。
49.图24为hek293细胞过表达flag-spastin和gfp-rab3a后以gfp作为ip抗体进行coip实验结果示意图。
50.图25为用spastin与rab3a抗体检测cos7细胞内源性spastin和rab3a的分布情况结果示意图。
51.图26为用spastin与rab3a抗体检测神经元细胞内源性spastin和rab3a的分布情况结果示意图。
52.图27为目标蛋白表达和微管情况荧光结果示意图。
53.图28为gfp mcherry、gfp mcherry-rab3a、gfp-spastin mcherry及gfp-spastin mcherry-rab3a各组相对微管荧光强度结果示意图。
54.图29为gfp-spastin mcherry及gfp-spastin mcherry-rab3a各组相对微管荧光强度结果示意图。
55.图30为转染rab3a对cos7细胞内spastin蛋白表达水平影响示意图。
56.图31为转染rab3a和spastin对cos7细胞内spastin蛋白表达水平影响示意图。
57.图32为转染rab3a后不同组别cos7内spastin蛋白表达水平影响示意图。
58.图33为转染spastin后不同组别cos7内spastin蛋白表达水平影响示意图。
59.图34为转染rab3a和spastin后不同组别cos7内spastin蛋白表达水平影响示意图。
60.图35为转染rab3a后不同组别cos7内spastin蛋白表达水平影响定量结果示意图。
61.图36为转染spastin后不同组别cos7内spastin蛋白表达水平影响定量结果示意图。
62.图37为转染rab3a和spastin后不同组别cos7内spastin蛋白表达水平影响定量结果示意图。
具体实施方式
63.为使本发明的目的、技术方案及效果更加清楚、明确，以下参照实施例对本发明作进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
64.在无特别说明的情况下，本发明上下文中所使用的试剂中，均通过市售获得。对于动物实验，相关程序及方法符合医学伦理学要求。本发明所使用的实验方法均为本领域的常规方法和技术。
65.生物学实验重复中选择具有代表性的结果呈现在上下文附图中，数据按照图示中规定的以mean
±
sd和mean
±
sem展示。所有实验至少重复三次。数据采用graphpad prism 5.0或spss 22.0软件进行分析。采用t检验、卡方检验、方差分析等常规医学统计学方法比较两组或两组以上的平均值差异。p＜0.05被认为是一个显著的差异。
66.在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、
ꢀ“
示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不
必针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。
67.实施例1 质粒和构建体的制备（1）获得rab3a和spastin序列，用于制备cdna，然后将其克隆到pegfp-c1（clontech，ca，usa），pgex-5x-3（amer-sham pharmacia biotech，nj，usa）和pcmv-tag2（ stratagene，ca，usa）载体上，并利用dna测序方法对所构建的构建体进行确认；（2）利用谷胱甘肽s-转移酶（gst）下拉分析：将脊髓组织切片磨碎并裂解，然后漂洗gst-琼脂糖珠（invitrogen，ca，美国），并与裂解液混合，在4℃孵育1h，然后在1000g离心10分钟。4℃。然后收集上清液，并将这些步骤再重复一次。然后将适合的珠子融合蛋白添加到脊髓组织中，然后将样品在4℃孵育过夜。在4℃下以1000g旋转5分钟后，未结合的蛋白用1ml洗涤缓冲液洗涤，然后在4℃下以1000g旋转样品1分钟。将该洗涤步骤重复六次，然后通过蛋白质印迹和质谱（ms）分析已被下拉的蛋白质。
68.其中质谱检测方法如下：首先使用nupage 4
–
12％凝胶（life technologies）分离这些蛋白质，然后使用胶体蓝染色试剂盒（life technologies），进行spastin-gst下拉测定的ms分析。用胰蛋白酶消化切下的蛋白质条带，然后将纳米级反相液相色谱-串联质谱与连接至线性离子阱（ltq，thermoelectron，美国）的hplc ultimate 3000（dionex，美国）一起使用，以分析这些肽在与数据相关的采集模式下。
69.同时对差异表达的蛋白质进行ipa分析（http://www.ingenuity.com）。ipa分析利用策划的数据库来识别这些蛋白质之间的重叠功能和关系，将得分分配给特定的生物学功能网络，以使得分＞2通常表明在给定的蛋白质子集中特定生物学功能的显着富集。这些分数对应于仅由于随机机会而检测到给定网络的对数概率。
70.实施例2 大鼠sci模型的构建实验所用sprague-dawley（sd）大鼠购自于中山大学实验动物中心，大鼠单独饲养在25
±
3℃的设施中，提供常规食物和水，具体包括如下步骤：（1）腹腔注射10％水合氯醛（0.35ml/100g体重）用于麻醉sd大鼠，此后进行2.5厘米的纵向背侧切口，露出t9-11脊突和椎板；（2）切除整个t10椎板，并且脊柱的暴露区域约为2.5mm
×
3mm；（3）用稳定器将t10切面双边固定，控制冲击头的氮气罐设置为18psi或124kpa。将带有大鼠的u型稳定器加载到路易斯维尔损伤系统设备（lisa）的平台上，并直接在撞击器下方调节硬脑膜/脊髓高度，同时通过激光束进行监测；（4）将碰撞深度调整为不同的损坏级别，对于轻度，中度和重度伤害，碰撞深度设置为0.6mm，1.0mm或1.8mm，时间设置为0.5s；（5）诱发损伤后，将稳定器从平台上拆下，将大鼠从稳定器中移出，评估受伤部位，并抑制出血，最后使用3-0丝线缝合大鼠的肌肉和皮肤。
71.目标sci模型动物符合以下伤害标准：麻痹性麻痹，尾巴摇摆反射，身体和腿部轻弹，脊髓缺血和伤口部位周围的水肿。假手术的动物接受了t10全椎板切除术，但是脊髓没
有受伤。所有大鼠均接受2000u/天的庆大霉素治疗，每8小时手动挤压每只大鼠的膀胱以帮助排尿，直到观察到自发性排尿。
72.应用上述构建的sci大鼠模型，在损伤后72小时使用多聚甲醛对大鼠进行灌流，并收集洗脱样品。
73.实施例3 rab3a调控神经元生长发育首先对rab3a过表达对神经元生长发育情况进行研究，具体包括如下步骤：（1）分别用gfp-rab3a和gfp（空白对照组）转染至原代培养72h的海马神经元细胞中；（2）继续48h后，对海马神经元细胞进行固定并拍照，标尺为100μm。
74.结果如图1-3所示，其中图1为海马神经元细胞免疫荧光染色结果示意图，图2为海马神经元细胞轴突和突起长度定量统计结果示意图，图3为海马神经元细胞轴突和突起数量定量统计结果示意图，n=20/组，结果以mean
±
sd表示，*表示p＜0.05。标尺为100μm。根据结果可知，在细胞内过表达rab3a，能够显著抑制神经元的生长（p＜0.05）。
75.随后，对抑制rab3a表达后神经元生长发育情况进行研究，具体包括如下步骤：（1）基于rab3a基因设计sirna（sirab3a），其序列如seq id no：1所示，为gccaugggcuucauucuaatt；将其转染至原代培养72h的海马神经元细胞中，同时以同样的实验条件转染空白载体至海马神经元细胞中作为对照组；（2）继续培养48h后，收集细胞裂解液进行western blot检测。
76.结果如图4-5所示。结果显示，转染有sirab3a干扰片段的海马神经元内源性rab3a表达量显著降低（p＜0.05）。
77.随后以同样的实验条件分别在海马神经元中转染rab3a干扰片段和空白载体，48h后收获细胞并量化了分支神经突的长度和总数。结果如图6-8所示，其中图6为以典型的rab3a染色为阳性标准，对两个样本中rab3a表达量进行统计，图7为海马神经元细胞轴突和突起长度定量统计结果示意图，图8为海马神经元细胞轴突和突起数量定量统计结果示意图，n=20/组，结果以mean
±
sd表示，*表示p＜0.05。标尺为100μm。结果显示，在rab3a干扰的神经元中观察到的分支明显多于空白对照组（p＜0.05）。上述实验结果清楚地表明rab3a的过表达和干扰可以影响分支的形成和神经突的生长。
78.实施例4 rab3a与spastin的关系研究对根据实施例2获得的大鼠的脊髓组织样品进行了高通量测序和蛋白质质谱分析，以确定spastin和rab3a与sci的关系。
79.首先在假手术组和sci组样品中进行高通量测序分析，结果如图9-12所示，其中图9和图10为rab3a与spastin在脊髓损伤与假手术组中的基因转录水平，图11和图12为rab3a与spastin在脊髓损伤与假手术组中的蛋白表达水平。结果显示，rab3a在sci组样品中蛋白水平及rna水平均下调，spastin在sci组样品中蛋白水平上调。进一步地分析发现，脊髓损伤后rab3a的转录水平与蛋白水平存在明显的相关性（参见图13）。
80.随后，通过蛋白印记和免疫荧光染色对sci组样品进行分析，结果如图14-15所示，其中图14为脊髓损伤与假手术组中大鼠的脊髓组织进行裂解后，免疫荧光检测spastin蛋白表达水平，箭头所指处为表达的spasitn，放大倍数为200倍；图15为脊髓损伤与假手术组中大鼠的脊髓组织进行裂解后，用免疫印迹法检测spastin蛋白表达水平，gapdh为内参。结
果显示，spastin在sci组样品中蛋白表达增多，进一步验证了spastin在脊髓损伤修复过程中的关键作用。
81.以上结果表明rab3a表达在sci过程中下调，spastin表达在sci过程中上调，从而提供了强有力的证据证明rab3a与spastin存在关联性，且与sci相关。
82.为了进一步明确rab3a中哪些肽段能够与spastin相互作用，将gst-spastin质粒转化至bl21大肠杆菌感受态中，通过诱导bl21表达得到大量gst-spastin，并通过gst特异性磁珠对gst-spastin进行纯化，同时进行western blot检测。检测结果如图16-20所示，其中图16为纯化gst和gst-spasitn重组蛋白跑胶后进行western blot检测结果，用gst抗体孵育；图17为纯化的gst和gst-spasitn蛋白分别与裂解液和大鼠大脑裂解液进行相互作用，相互作用的产物跑电泳胶后进行考马斯亮蓝色染色结果；图18-20为与spastin发生相互作用的rab3a的三条肽段，分别为msesldtadpavtgak、lqiwdtagqer和lqiwetagqer。上述结果进一步证实了rab3a与gst-spastin相互作用的能力以及具体作用的肽段。
83.为了评估rab3a是否与spastin特异性相互作用，进一步使用大鼠脑提取物的共免疫沉淀（co-ip）分析进行验证。具体地，使用spastin特异性抗体在大鼠脑裂解液中拉下spastin，并通过westen blot使用检测rab3a，发现spastin可以共沉淀rab3a（参见图21）。同时，使用同样的方法利用rab3a特异性抗体也可以共沉淀spastin（参见图22）。此外，利用相同的实验在hek293细胞中共表达带有标签的rab3a和spastin，并通过标签抗体检测，结果进一步证明rab3a与spastin发生相互作用（参见图23-24）。随后，利用rab3a和spastin抗体检测神经元和cos7细胞内源性rab3a和spastin的分布情况，结果如图25-26所示，合并图像的显示了rab3a和spastin的共定位位置，enlargement为对应框的放大图，标尺为100或25μm。该免疫荧光分析结果揭示了rab3a和spastin在神经元中的共定位。
84.实施例5 rab3a对spastin切割功能的影响及其机制将gfp mcherry、gfp mcherry-rab3a、gfp-spastin mcherry或gfp-spastin mcherry-rab3a分别转染cos7细胞，转染12h后收获细胞，使用tubulin抗体和相应的荧光二抗检测微管情况。
85.检测结果如图27-29所示，其中图27为目标蛋白表达和微管情况荧光结果示意图，图28和图29为比较各组之间的相对微管荧光强度并进行统计，n=30/组，结果表示为mean
±
sd和*或#表示p＜0.05，标尺为100μm和20μm。结果显示，转染spastin可以明显减弱微管荧光强度，说明过表达spastin可以切割细胞体内的微管；而共转染rab3a和spastin组微管强度明显比spastin组强，说明rab3a可以抑制spastin切割微管的能力。
86.为探寻rab3a影响spastin功能的机制，将cos7细胞转染gfp、gfp-rab3a或共转染gfp-rab3a和flag-spastin，收集细胞裂解液，进行westen blot，分别使用spastin和flag抗体检测细胞内源性和外源性的spastin表达量。检测结果如图30-31所示。结果显示，rab3a可以显著降低内源性和外源性spastin的表达量。
87.随后将gfp-rab3a、flag-spastin或gfp-rab3a和flag-spastin分别转染为cos7细胞，并分为空白组，leupeptin组和mg-132治疗组，结果如图32-37所示。结果显示，leupeptin和mg-132均可以逆转rab3a介导的spastin降解，说明rab3a是通过溶酶体途径介导spastin的降解。
88.上述结果表明，rab3a在sci中起关键作用，并与spastin相互作用以调控神经突向
外生长。通过鉴定在sci中差异表达的蛋白质，能够确定rab3a在此过程中起作用，而且证明了rab3a表达水平在sci过程中下调。此外还发现，rab3a能够在体内和体外与spastin发生物理相互作用，rab3a通过溶酶体途径调控spastin降解，从而影响spastin功能。这些发现共同强调了信号转导途径，其中rab3a介导spastin降解调控神经突分支的形成和生长。由于sci是致残的主要原因，修复损伤或变性引起的脊髓结构缺陷于现代再生医学领域至关重要。可以设计出多种药物干预措施来治疗sci并协助相关的组织修复，并且可以结合其他细胞干预措施。
89.以上具体实施方式部分对本发明所涉及的分析方法进行了具体的介绍。应当注意的是，上述介绍仅是为了帮助本领域技术人员更好地理解本发明的方法及思路，而不是对相关内容的限制。在不脱离本发明原理的情况下，本领域技术人员还可以对本发明进行适当的调整或修改，上述调整和修改也应当属于本发明的保护范围。

技术特征：
1.rab3a抑制剂在制备治疗脊髓损伤和修复的药物中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述rab3a抑制剂选自基于rab3a基因设计的sirna。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述基于rab3a基因设计的sirna序列如seq id no：1所示。4.一种用于治疗脊髓损伤和修复的药物组合物，其特征在于，包括rab3a抑制剂和spastin蛋白或其活性片段。5.根据权利要求4所述的药物组合物，其特征在于，所述rab3a抑制剂选自基于rab3a基因设计的sirna。6.根据权利要求5所述的药物组合物，其特征在于，所述基于rab3a基因设计的sirna序列如seq id no：1所示。7.一种筛选用于治疗脊髓损伤和修复的药物的方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）将候选药物作用于脊髓损伤动物模型；（2）通过检测脊髓损伤动物模型体内rab3a和/或spastin表达水平，从而获得目标药物；当候选药物使得rab3a表达水平降低和/或使得spastin表达水平增加时，即为目标药物。

技术总结
本发明涉及一种用于治疗脊髓损伤和修复的药物组合物及其应用。本发明通过研究发现，Rab3A在SCI中起关键作用，并与Spastin相互作用以调控神经突向外生长。通过鉴定在SCI中差异表达的蛋白质，证明了Rab3A表达水平在SCI过程中下调。此外还发现，Rab3A能够与Spastin发生物理相互作用，通过溶酶体途径调控Spastin降解，从而影响Spastin功能。这些发现共同强调了信号转导途径，其中Rab3A介导spastin降解调控神经突分支的形成和生长。由于SCI是致残的主要原因，修复损伤或变性引起的脊髓结构缺陷于现代再生医学领域至关重要。可以设计出多种药物干预措施来治疗SCI并协助相关的组织修复，并且可以结合其他细胞干预措施。并且可以结合其他细胞干预措施。并且可以结合其他细胞干预措施。


技术研发人员：张国威 陈云 杨裕豪 林宏生
受保护的技术使用者：暨南大学
技术研发日：2022.04.22
技术公布日：2022/5/25