丹凤牡丹萃取物用于制备皮肤调理组合物的用途的制作方法

1.本发明是关于丹凤牡丹萃取物，特别是关于丹凤牡丹萃取物用于制备皮肤调理的组合物的用途。
背景技术：
：：2.牡丹是勺药科(paeoniaceae)勺药属(peaonia)的落叶灌木，其花朵美丽具有观赏价值。分布于中国山东、河南、陕西、安徽等省份。3.中药大辞典明文记载：「安徽省铜陵凤凰山所产丹皮质量最佳」，故称凤丹或丹凤。丹凤的干燥根皮具有清热凉血、活血散瘀的功效。技术实现要素：4.为了提升牡丹的价值，发明人继续研究开发牡丹的花朵相关产品及其用途。5.有鉴于此，本发明提供一种丹凤牡丹萃取物的用途，其是用于制备皮肤调理的组合物，且丹凤牡丹萃取物提取自丹凤牡丹的花朵部位。6.在一实施例中，丹凤牡丹萃取物用以提升皮肤细胞玻尿酸生成量。7.在一实施例中，丹凤牡丹萃取物用以提升has2基因表现量及has3基因表现量。8.在一实施例中，丹凤牡丹萃取物用以提升皮肤保湿纤维。在一实施例中，丹凤牡丹萃取物用以维质皮肤角质细胞结构。9.在一实施例中，该丹凤牡丹萃取物用以提升tgm1基因表现量及角蛋白相关基因表现量。10.在一实施例中，丹凤牡丹萃取物用以调节皮肤细胞水分含量。在一实施例中，丹凤牡丹萃取物用以提升aqp3基因表现量及gba基因表现量。11.在一实施例中，丹凤牡丹萃取物用以提升皮肤细胞内丝聚蛋白(filaggrin)的含量。在一实施例中，丹凤牡丹萃取物用以提升flg基因表现量。其中，flg基因表现量提升时，可以提升皮肤内的丝聚蛋白的含量，并进一步提升天然保湿因子的含量(naturalmoisturizingfactors,nmf)。于此，天然保湿因子nmf是低相对分子质量水溶性物质的复杂的混合物，而天然保湿因子nmf的来源是丝聚蛋白经一系列过程而产生组成nmf的各种组分。12.在一实施例中，皮肤调理是指提升肌肤含水量、降低经皮水分散失量及提升肌肤弹力等。13.在一实施例中，皮肤调理的组合物为食品组合物，且丹凤牡丹萃取物有效剂量为4ml/日。14.在一实施例中，皮肤调理的组合物为外用组合物，且丹凤牡丹萃取物的有效浓度至少5％。15.综上所述，根据本发明任一实施例的丹凤牡丹萃取物，其可用于制备皮肤调理的组合物。换言之，前述之组合物具有下列一种或多种功能：提升皮肤细胞玻尿酸生成量、提升皮肤保湿纤维含量、维持皮肤角质细胞结构、提升皮肤内的丝聚蛋白的含量、调节皮肤细胞水分含量，降低经皮水分散失量及提升肌肤弹力等。16.以下结合附图和具体实施例对本发明进行详细描述，但不作为对本发明的限定。附图说明17.图1是丹凤牡丹萃取物促进玻尿酸生成量实验结果图。18.图2是丹凤牡丹萃取物促进玻尿酸分泌基因表现实验结果图。19.图3是丹凤牡丹萃取物促进维持皮肤角质细胞结构相关基因表现实验结果图。20.图4是丹凤牡丹萃取物提升皮肤保湿纤维基因表现实验结果图。21.图5是丹凤牡丹萃取物调节皮肤细胞水分含量相关基因表现实验结果图。22.图6是丹凤牡丹萃取物人体实验皮肤含水量实验结果图。23.图7是丹凤牡丹萃取物人体实验皮肤经皮水分散失率实验结果图。24.图8是丹凤牡丹萃取物人体实验肌肤弹力提升实验结果图。25.图9是丹凤牡丹萃取物人体实验肌肤皱纹改善实验结果图。26.图10是丹凤牡丹萃取物人体实验肌肤纹理改善实验结果图。27.图11是丹凤牡丹萃取物人体实验问卷结果统计实验结果图。28.图12是丹凤牡丹萃取物面膜人体实验肌肤弹力提升实验结果图。29.图13是丹凤牡丹萃取物面膜人体实验肌肤含水量提升实验结果图。30.图14是丹凤牡丹萃取物面膜人体实验肌肤光泽提升实验结果图。31.图15是丹凤牡丹萃取物面膜人体实验改善肌肤泛红实验结果图。具体实施方式32.关于本文中所使用之浓度符号「％」通常是指重量百分浓度，而浓度符号「vol％」通常是指体积百分浓度。33.关于本文中所使用之「丹凤牡丹」通常是指丹凤牡丹的花朵。其中花朵可包含原始、经干燥或以其他物理方式加工以利于处理之花朵，其可进一步包含完整、剁碎、切丁、碾磨、研磨或以其他方式经加工以影响原物料之大小及实体完整性之花朵。34.在一些实施例中，丹凤牡丹萃取物是指将丹凤牡丹的花朵进行萃取、过滤、浓缩、杀菌并干燥后制得的产品。举例而言，将丹凤牡丹花清洗后，以萃取溶剂进行萃取以得到初萃取液，接着将初萃取液过滤去除杂质后，以过滤后的初萃取液进行浓缩以得到浓缩液。于此，浓缩液丹凤牡丹萃取物。35.在一些实施例中，首先，以人工或机器的方式采摘丹凤牡丹花朵并以清水冲洗备用。花朵与水、醇、或醇水混合物之萃取溶剂，萃取溶剂较佳为水，以15-75：1-5之重量比混合，均质后在溶剂中以50-100℃进行萃取0.5-3小时。萃取后冷却至室温，将初萃取物经由400mesh之滤网过滤以获得滤液。最后，将滤液于45-70℃进行减压浓缩得到浓缩液。最后，将浓缩液以喷雾干燥机进行喷雾干燥后，得到之粉末即为本发明一实施例之丹凤牡丹萃取物。36.在另一些实施例中，接着将上述浓缩液杀菌，并将杀菌后的浓缩液以喷雾干燥的方式干燥为粉末。于此，干燥后的粉末是本发明另一实施例之丹凤牡丹萃取物。37.在一些实施例中，丹凤牡丹萃取物可为市售之丹凤牡丹萃取液或丹凤牡丹萃取粉。在一些实施例中，丹凤牡丹萃取物系由10公斤的花朵原料获得1公斤之萃取物。38.在一实施例中，丹凤牡丹萃取物为粉末状。在一实施例中，丹凤牡丹萃取物为可食用级的粉末。39.在一实施例中，本发明提供一种丹凤牡丹萃取物的用途，其是用于制备皮肤调理的组合物，且丹凤牡丹萃取物提取自丹凤牡丹的花朵部位。40.在一实施例中，丹凤牡丹萃取物用以提升皮肤细胞玻尿酸生成量。玻尿酸可以防止皮肤自然老化，并保护皮肤免于太阳紫外线、烟草烟雾和空气中污染物质之危害。玻尿酸亦具有帮助增加皮肤水份，使肌肤结构紧密膨润，以减少皮肤细纹和皱纹的出现。另外，玻尿酸在伤口愈合中也起着关键作用，当皮肤细胞需要修复或受损时其浓度亦会增加，且其应用于皮肤伤口已被证明可以减轻伤口的大小且减缓疼痛，亦可帮助降低伤口细胞感染风险。另外，玻尿酸对于骨关节炎亦具有帮助，实验证实每天食用玻尿酸至少两个月，即可显著减轻骨关节炎患者的膝关节疼痛，亦有助于减轻胃酸反流症状，而玻尿酸具有出色的保湿性，其亦常用于治疗干眼症、减缓骨质疏松及减轻膀胱疼痛症候群等诸多功效。41.在一实施例中，丹凤牡丹萃取物用以提升has2基因表现量及has3基因表现量。其中，has2基因表现量提升时，可以促进皮肤细胞制造高分子玻尿酸，高分子玻尿酸具有黏性及支撑特性，可支撑肌肤的结构，改善肌肤松弛。has3基因表现量提升时，可以促进皮肤细胞合成小分子玻尿酸，小分子玻尿酸具有保水特性，可维持肌肤的保水性，改善肌肤皱纹及细纹。42.在一实施例中，丹凤牡丹萃取物用以提升皮肤保湿纤维。在一实施例中，丹凤牡丹萃取物用以维持皮肤角质细胞结构。43.在一些实施例中，该丹凤牡丹萃取物用以提升tgm1基因表现量及角蛋白相关基因表现量。其中，tgm1基因表现量提升时，可以维持皮肤角质细胞膜，使角质层能防止水分散失。角蛋白相关基因(keratins)基因表现量提升时，可以维持角质细胞的结构紧密完整，使角质层能有保护皮肤内层状态柔嫩的能力。于此，角蛋白相关基因包括krt1基因、krt10基因及krt14基因。44.在一实施例中，丹凤牡丹萃取物用以调节皮肤细胞水分含量。在一实施例中，丹凤牡丹萃取物用以提升aqp3基因表现量及gba基因表现量。其中，aqp3基因表现量提升时，可以提升皮肤内的水通道蛋白的含量，水通道蛋白的含量是一种细胞膜上跨膜运输水，甘油和尿素等小分子物质的转运蛋白。并且aqp3基因参与皮肤水合、皮肤屏障功能以及创伤愈合，可以维持皮肤的正常形态和功能。其中，gba基因表现量提升时，代表合成神经酰胺(ceramide)酵素增加，神经酰胺是皮肤角质层细胞间隙内的脂质，是一种保湿成分。45.在一实施例中，丹凤牡丹萃取物用以提升皮肤保湿纤维。在一实施例中，丹凤牡丹萃取物用以提升flg基因表现量。其中，flg基因表现量提升时，可以提升皮肤内的丝聚蛋白(filaggrin)的含量，丝聚蛋白用来连接角蛋白纤维以使得角蛋白纤维规则的聚集，以在皮肤的最外层形成物理屏障。异位性皮肤炎最重要的致病基因是丝聚蛋白的突变，不正常的丝聚蛋白导致角质层功能缺损，皮肤的保湿度大幅下降，进而导致皮肤干燥与皮肤炎。46.在一实施例中，皮肤调理是指提升肌肤含水量、降低经皮水分散失量及提升肌肤弹力等。47.在一实施例中，皮肤调理的组合物为食品、饮品或营养补充剂，且丹凤牡丹萃取物有效剂量为4ml/日。换言之，食用、饮品或营养补充剂包含特定含量的丹凤牡丹萃取物。在一些实施例中，食品可为一般食品、保健食品、膳食补充品或食品添加物(foodadditive)。48.上述保健食品(foodforspecialhealthuse,foshu)也可称为功能(性)食品(functionalfood)，是指加工成使得供给营养之外而且有效地表现出生物体调节功能的高效果的食品。在此“功能(性)”是指对人体的结构和功能调节营养素或者对生理学作用等保健用途获得有用的效果。本发明的食品可以通过本领域常用的方法制备，在上述制备时，可以通过添加本领域通常添加的原料和成分来制备。另外，上述食品的剂型只要被认为是食品的剂型就可以不受限制地制备。本发明的食品用组合物可以以多种形式的剂型制备，并且与一般药品不同，以食品为原料，因而具有没有因长期服用药品而可能产生的副作用等的优点，具有优异的可携带性使得本发明的食品可以作为用于增强免疫增强效果的辅助剂来摄入。49.在一些实施例中，前述之食品可利用熟习此技艺者所详知的技术而被制造成适合于口服的剂型。在一些实施例中，一般食品可为但不限于：饮料(beverages)、发酵食品(fermentedfoods)、烘培产品(bakeryproducts)或调味料。50.上述组合物可以进一步包含生理学上可接受的载体，并且载体的种类没有特别限制，并且可以使用本
技术领域：
：中常用的任何载体。51.另外，上述组合物可以包含通常用于食品中而可提高气味、味道、视觉等的附加成分。例如，可以包含0.1-5重量％的维生素a、c、d、e、b1、b2、b6、b12、烟碱酸(niacin)、生物素(biotin)、叶酸(folate)、泛酸(panthotenicacid)等。另外，可以包含锌(zn)、铁(fe)、钙(ca)、铬(cr)、镁(mg)、锰(mn)、铜(cu)、铬(cr)等的矿物质。另外，可以包含赖氨酸、色氨酸、半胱氨酸、缬氨酸等的氨基酸。52.另外，上述组合物可以包含氧化防止剂(丁基羟基茴香醚(bha)、丁基羟基甲苯(bht)等)、着色剂(焦油色素等)、香料(香兰素、内酯类等)、成色剂(亚硝酸钠、亚硝酸钠等)、防腐剂(山梨酸钾、苯甲酸钠、水杨酸、脱氢乙酸钠等)、漂白剂(亚硫酸钠)、调味料(msg谷氨酸钠等)、甜味料(甘素(dulcin)、甜蜜素(cyclamate)、糖精(saccharin)、钠等)、膨胀剂(明矾、d-酒石酸氢钾等)、强化剂、乳化剂、增稠剂(糊料)、皮膜剂、胶基础剂、泡沫抑制剂、溶剂、改良剂等的食品添加物(foodadditives)。上述添加物可以根据食品的种类择一或多进行添加以适当的量。53.在一些实施例中，能藉由习知方法于原料制备时添加任一实施例的丹凤牡丹萃取物(即作为食品添加物)，或是于食品的制作过程中添加任一实施例的丹凤牡丹萃取物(即作为食品添加物)，而与任一种可食性材料配制成供人类与非人类动物摄食的食用产品。54.在一些实施例中，前述之组合物可为医药品。换言之，此医药品包含有有效含量的丹凤牡丹萃取物。55.在一些实施例中，前述之医药品可利用熟习此技艺者所详知的技术而被制造成一适合于经肠道或口服的投药剂型。这些投药剂型包括，但不限于：锭剂(tablet)、片剂(troche)、口含锭(lozenge)、丸剂(pill)、胶囊(capsule)、分散性粉末(dispersiblepowder)或细颗粒(granule)、溶液、悬浮液(suspension)、乳剂(emulsion)、糖浆(syrup)、酏剂(elixir)、浓浆(slurry)以及类似之物。56.在一些实施例中，前述之医药品可利用熟习此技艺者所详知的技术而被制造成一适合于非经肠地道(parenterally)或局部地(topically)投药的剂型，这些投药剂型包括，但不限于：注射品(injection)、无菌的粉末(sterilepowder)、外部制剂(externalpreparation)以及类似之物。在一些实施例中，该医药品可以一选自于由下列所构成之群组中的非经肠道途径(parenteralroutes)来投药：皮下注射(subcutaneousinjection)、表皮内注射(intraepidermalinjection)、皮内注射(intradermalinjection)以及病灶内注射(intralesionalinjection)。57.在一些实施例中，医药品可进一步包含有被广泛地使用于药物制造技术之医药上可接受的载剂(pharmaceuticallyacceptablecarrier)。例如，医药上可接受的载剂可包含下列的试剂中一种或多种：溶剂(solvent)、缓冲液(buffer)、乳化剂(emulsifier)、悬浮剂(suspendingagent)、分解剂(decomposer)、崩解剂(disintegratingagent)、分散剂(dispersingagent)、黏结剂(bindingagent)、赋形剂(excipient)、安定剂(stabilizingagent)、螯合剂(chelatingagent)、稀释剂(diluent)、胶凝剂(gellingagent)、防腐剂(preservative)、润湿剂(wettingagent)、润滑剂(lubricant)、吸收延迟剂(absorptiondelayingagent)、脂质体(liposome)以及类似之物。有关这些试剂的选用与数量是落在熟习此项技术之人士的专业素养与例行技术范畴内。58.在一些实施例中，医药上可接受的载剂包含有一选自于由下列所构成之群组中的溶剂：水、生理盐水(normalsaline)、磷酸盐缓冲生理盐水(phosphatebufferedsaline,pbs)、含有醇的水性溶液(aqueoussolutioncontainingalcohol)。59.在一实施例中，皮肤调理的组合物为外用组合物，且丹凤牡丹萃取物的有效浓度至少5％。在一些实施例中，前述之外用组合物可为化妆品或保养品。换言之，化妆品或保养品包含特定含量的丹凤牡丹萃取物。60.在一些实施例中，前述之化妆品或保养品可为下列任一种型态：化妆水、凝胶、冻膜、泥膜、乳液、乳霜、唇膏、粉底、粉饼、蜜粉、卸妆油、卸妆乳、洗面奶、沐浴乳、洗发精、护发乳、防晒乳、护手霜、指甲油、香水、精华液及面膜。在一些实施例中，前述之化妆品或保养品可视需要更包含外用品可接受成分。在一些实施例中，外用品可接受成分可例如为乳化剂、渗透促进剂、软化剂、溶剂、赋型剂、抗氧化剂、或其组合。61.实施例一：丹凤牡丹萃取物的制备62.原料：丹凤牡丹a(学名：paeoniaostii)，以及丹凤牡丹b(学名：paeoniasuffruiticosaandr.)的花朵，是采购自长沙农建科技有限公司。63.丹凤牡丹萃取物的萃取方式是将丹凤牡丹a的花朵于80±10℃下，将花朵比溶剂以1：15的体积比进行萃取2小时而得到初萃取物。于此，溶剂是水。接着，将初萃取物冷却至室温，然后将初萃取物以400网目(mesh)的滤网对初萃取物过滤而得到滤液，然后于55±10℃下对滤液进行减压浓缩而得到浓缩液。于此，浓缩液为丹凤牡丹萃取物a。64.接着，依上述相同的制法，将丹凤牡丹b的花朵制得丹凤牡丹萃取物b。65.将2.5ml的上述丹凤牡丹萃取物a加到50ml的饮用水内，得到浓度为0.05mg/ml的丹凤牡丹萃取物c。66.实施例二：玻尿酸生成量实验67.材料：68.细胞株采用人类初代皮肤角质细胞hpekp(humanprimaryepidermalkeratinocytes)。采购自cellntec公司(瑞士)，型号hpek-50。69.培养基采用为无血清之角质细胞培养液(keratinocyte-sfm)。采购自gibco公司，美国，编号为#10724-011。70.人类玻尿酸检测套组(humanhyaluronicacid,haelisakit)，购自cusabiobiotech。71.酵素免疫分析仪(elisareader)，购自biotek公司，美国。72.测试流程：73.将人类初代皮肤角质细胞以每孔1×104个的数量，接种于每孔培养于每孔含2ml培养基之培养盘中。其中，实验组之培养液额外加入丹凤牡丹萃取物a，使其浓度为0.25mg/ml。于对照组之培养液不再添加其他物质。各组进行三重复，并于37℃下，培养24小时。74.接下来，每孔取100μl的培养基，然后加到pre-coatedelisa盘中，于37℃下培养2小时。之后，移除每个孔中的培养基，勿进行清洗。于每个孔中添加100μl的生物素抗体(biotin-antibody)，并于37℃下培养1小时。反应完毕后，移除每孔之培养基，并以洗涤缓冲液(washbuffer)200μl进行清洗，每次清洗静置2分钟，重复此步骤三次。最后一次清洗完成后，透过抽吸除去所有剩余的洗涤缓冲液。75.接着，每个孔中加入100μlhrp-抗生物素蛋白(hrp-avidin)，并在37℃下培养1小时。反应完毕后，移除每孔之培养基，并以洗涤缓冲液(washbuffer)200μl进行清洗，每次清洗静置2分钟，重复此步骤三次。最后一次清洗完成后，透过抽吸除去所有剩余的洗涤缓冲液。76.于每孔中添加90μltmb底物(tmbsubstrate)，并37℃下避光反应15-30分钟。于每孔中添加50μl终止液(stopsolution)，轻轻敲打培养盘以确保其充分混合。最后，利用酵素免疫分析仪(elisareader)于5分钟内测量每孔450nm之吸光值。77.所得结果利用excel软件进行studentt-test以决定两个样本群体之间是否在统计上具有显著差异，如图1所示(图式中「*」代表p值小于0.05，「**」代表p值小于0.01，以及「***」代表p值小于0.001。当「*」越多时，代表统计上的差异越显著)。78.参考图1。在空白组的人类初代皮肤角质细胞并未经过丹凤牡丹萃取的处理，也就是指其在正常的生理代谢情况下，设定其所能产生的玻尿酸量为100％。而实验组的人类初代皮肤角质细胞在经过丹凤牡丹萃取的处理2小时后，其相对于空白组所产生的玻尿酸量为117.3％。可知，丹凤牡丹萃取物在短短2小时内即可明显促进人类初代皮肤角质细胞产生玻尿酸。79.实施例三：玻尿酸分泌基因表现80.本实施例的材料及测试流程同实施例二。81.空白组：仅添加培养基，然后在37℃下培养24小时。82.实验组：添加丹凤牡丹萃取物a，使其浓度为0.125mg/ml，然后在37℃下培养24小时。83.于此，藉由cdna进行定量实时反转录聚合酶连锁反应可间接定量各基因的mrna表现量，进而推断各基因编码的蛋白质的表现量，如图2所示。84.表一[0085][0086]于此，使用2-δδct方法测定目标基因的相对表现量。所谓相对表现量定义为一目标基因相对于控制组之相应基因的rna表现量的倍数。该方法以gapdh基因的循环阈值(ct)作为内部对照之参考基因的循环阈值，按照以下公式计算倍数变化：δct＝实验组或控制组的目标基因的ct-内部对照的ctδδct＝实验组的δct-控制组的δct倍数变化＝2-δδct平均值。[0087]参考图2。将空白组的has2基因的表现量视为1时，实验组相对于空白组的has2基因的表现量为1.61，也就是说，相较于空白组，实验组的has2基因的表现量显著地的提高。[0088]将空白组的has3基因的表现量视为1时，实验组相对于空白组的has3基因的表现量为1.34，也就是说，相较于空白组，实验组的has3基因的表现量显著地的提高。[0089]需要特别说明的是，图2中显示的系以相对倍率呈现，即将空白组的定量结果视为1来将实验组的定量结果换算成相对于空白组的表现量。其中，使用excel软件之stdev公式计算标准偏差，并在excel软件中以单尾学生t检验(studentt-test)分析是否具有统计上的显著差异。图式中，「*」代表相对于空白组p值小于0.05，「**」代表相对于空白组p值小于0.01，以及「***」代表相对于空白组p值小于0.001。[0090]由此可知，当皮肤细胞在丹凤牡丹萃取物的处理下，可以明显提高玻尿酸分泌相关基因的表现量。也就是说，丹凤牡丹萃取物可以有效促进细胞自体分泌或合成玻尿酸，提升细胞内玻尿酸含量。[0091]实施例四：维持皮肤角质细胞结构相关基因表现[0092]本实施例的材料及测试流程同实施例二。[0093]空白组：仅添加培养基，然后在37℃下培养24小时。[0094]实验组：添加丹凤牡丹萃取物a，使其浓度为0.125mg/ml，然后在37℃下培养24小时。[0095]于此，藉由cdna进行定量实时反转录聚合酶连锁反应可间接定量各基因的mrna表现量，进而推断各基因编码的蛋白质的表现量，如图3所示。[0096]表二[0097][0098][0099]于此，使用2-δδct方法测定目标基因的相对表现量。所谓相对表现量定义为一目标基因相对于控制组之相应基因的rna表现量的倍数。该方法以tbp基因的循环阈值(ct)作为内部对照之参考基因的循环阈值，按照以下公式计算倍数变化：δct＝实验组或控制组的目标基因的ct-内部对照的ctδδct＝实验组的δct-控制组的δct倍数变化＝2-δδct平均值。[0100]参考图3。将空白组的tgm1基因的表现量视为1时，实验组相对于空白组的tgm1基因的表现量为1.23，也就是说，相较于空白组，实验组的tgm1基因的表现量显著地的提高。[0101]将空白组的krt1基因的表现量视为1时，实验组相对于空白组的krt1基因的表现量为1.61，也就是说，相较于空白组，实验组的krt1基因的表现量显著地的提高。[0102]将空白组的krt10基因的表现量视为1时，实验组相对于空白组的krt10基因的表现量为2.12，也就是说，相较于空白组，实验组的krt10基因的表现量显著地的提高。[0103]将空白组的krt14基因的表现量视为1时，实验组相对于空白组的krt14基因的表现量为1.24，也就是说，相较于空白组，实验组的krt14基因的表现量显著地的提高。[0104]需要特别说明的是，图3中显示的系以相对倍率呈现，即将空白组的定量结果视为1来将实验组的定量结果换算成相对于空白组的表现量。其中，使用excel软件之stdev公式计算标准偏差，并在excel软件中以单尾学生t检验(studentt-test)分析是否具有统计上的显著差异。图式中，「*」代表相对于空白组p值小于0.05，「**」代表相对于空白组p值小于0.01，以及「***」代表相对于空白组p值小于0.001。[0105]由此可知，当皮肤细胞在丹凤牡丹萃取物的处理下，可以明显提高维持皮肤角质细胞结构相关基因表现量。也就是说，丹凤牡丹萃取物可以有效促进角质层结构紧密，防止皮肤内水分散失，具有皮肤保水的功效。[0106]实施例五：提升皮肤保湿纤维基因表现[0107]本实施例的材料及测试流程同实施例二。[0108]空白组：仅添加培养基，然后在37℃下培养24小时。[0109]实验组：添加丹凤牡丹萃取物a，使其浓度为0.125mg/ml，然后在37℃下培养24小时。[0110]于此，藉由cdna进行定量实时反转录聚合酶连锁反应可间接定量各基因的mrna表现量，进而推断各基因编码的蛋白质的表现量，如图4所示。[0111]表三[0112][0113]于此，使用2-δδct方法测定目标基因的相对表现量。所谓相对表现量定义为一目标基因相对于控制组之相应基因的rna表现量的倍数。该方法以tbp基因的循环阈值(ct)作为内部对照之参考基因的循环阈值，按照以下公式计算倍数变化：δct＝实验组或控制组的目标基因的ct-内部对照的ctδδct＝实验组的δct-控制组的δct倍数变化＝2-δδct平均值。[0114]参考图4。将空白组的flg基因的表现量视为1时，实验组相对于空白组的flg基因的表现量为1.74，也就是说，相较于空白组，实验组的flg基因的表现量显著地的提高。[0115]需要特别说明的是，图4中显示的系以相对倍率呈现，即将空白组的定量结果视为1来将实验组的定量结果换算成相对于空白组的表现量。其中，使用excel软件之stdev公式计算标准偏差，并在excel软件中以单尾学生t检验(studentt-test)分析是否具有统计上的显著差异。图式中，「*」代表相对于空白组p值小于0.05，「**」代表相对于空白组p值小于0.01，以及「***」代表相对于空白组p值小于0.001。[0116]由此可知，当皮肤细胞在丹凤牡丹萃取物的处理下，可以明显提高皮肤保湿纤维基因相关基因表现量。也就是说，丹凤牡丹萃取物可以有效促皮肤内的丝聚蛋白增生，进而具有皮肤保水的功效。[0117]实施例六：皮肤细胞水分含量相关基因表现[0118]本实施例的材料及测试流程同实施例二。[0119]空白组：仅添加培养基，然后在37℃下培养24小时。[0120]实验组：添加丹凤牡丹萃取物a，使其浓度为0.125mg/ml，然后在37℃下培养24小时。[0121]于此，藉由cdna进行定量实时反转录聚合酶连锁反应可间接定量各基因的mrna表现量，进而推断各基因编码的蛋白质的表现量，如图5所示。[0122]表四[0123][0124]于此，使用2-δδct方法测定目标基因的相对表现量。所谓相对表现量定义为一目标基因相对于控制组之相应基因的rna表现量的倍数。该方法以tbp基因的循环阈值(ct)作为内部对照之参考基因的循环阈值，按照以下公式计算倍数变化：δct＝实验组或控制组的目标基因的ct-内部对照的ctδδct＝实验组的δct-控制组的δct倍数变化＝2-δδct平均值。[0125]参考图5。将空白组的aqp3基因的表现量视为1时，实验组相对于空白组的aqp3基因的表现量为1.20，也就是说，相较于空白组，实验组的aqp3基因的表现量显著地的提高。[0126]将空白组的gba基因的表现量视为1时，实验组相对于空白组的gba基因的表现量为1.58，也就是说，相较于空白组，实验组的gba基因的表现量显著地的提高。[0127]需要特别说明的是，图5中显示的系以相对倍率呈现，即将空白组的定量结果视为1来将实验组的定量结果换算成相对于空白组的表现量。其中，使用excel软件之stdev公式计算标准偏差，并在excel软件中以单尾学生t检验(studentt-test)分析是否具有统计上的显著差异。图式中，「*」代表相对于空白组p值小于0.05，「**」代表相对于空白组p值小于0.01，以及「***」代表相对于空白组p值小于0.001。[0128]由此可知，当皮肤细胞在丹凤牡丹萃取物的处理下，可以明显提高细胞水分含量相关基因的表现量。也就是说，丹凤牡丹萃取物可以有效促进细胞膜上的转运蛋白表现，提升细胞内水分含量。[0129]实施例七：丹凤牡丹萃取物食品人体试验[0130]受试者：8位受试者(干性肤质的成年人，干性肤质是指平日有肌肤紧绷感受、脱屑及干痒等状况)。[0131]测试项目及仪器：[0132]1、肌肤含水量(hydration)：使用购自德国courage khazakaelectronic公司之肌肤含水量检测探头cm825(c kmultiprobeadaptersystem,germany)对同受试者的面部肌肤进行检测。该检测探头系基于电容的原理进行测量。当水分含量发生变化时，皮肤的电容值亦发生变化，故可通过测定皮肤电容值，分析皮肤表面的含水量。[0133]2、经皮水分散失(trans-epidermalwaterloss,tewl)：使用购自德国courage khazakaelectronic公司之肌肤水分散失检测探头tm300(c kmultiprobeadaptersystem,germany)对受试者的面部肌肤进行检测。该检测探头系使用两端开放的圆柱形腔体在皮肤表面形成相对稳定的测试环境，通过测定不同两点的水蒸气压梯度，计算出经表皮蒸发的水分量，以此来衡量皮肤表面水分流失情况。[0134]3、肌肤弹力(elasticity)：使用购自德国courage khazakaelectronic公司之肌肤弹力检测探头mpa580(c kmultiprobeadaptersystem,germany)对同一受试者在饮用前与饮用后的面部肌肤进行检测。测试原理是基于吸力和拉伸原理，在被测试的皮肤表面产生一个负压将皮肤吸进一个测试探头内，透过光学测试系统检测皮肤被吸进探头内的深度，并以软件分析计算皮肤弹性与紧实度。[0135]4、肌肤皱纹量(wrinkles)：使用美国canfield所贩卖之visia高阶数字肤质检测仪进行检测，透过高分辨率之相机镜头对同一受试者在饮用前与饮用后的面部肌肤进行拍摄，藉由标准白光照射、侦测皮肤阴影的变化，即可侦测纹理位置并得到一数值，可代表皮肤的平滑程度。[0136]5、肌肤纹理(texture)：使用美国canfield所贩卖之visia高阶数字肤质检测仪对受试者的面部肌肤进行检测。其原理乃以可见光拍摄高分辨率之肌肤影像，并以内建软件根据皮肤的凹陷与凸起进行粗糙度分析。测量数值越高，说明皮肤越粗糙。[0137]6、受试者对于肌肤干燥紧绷、黯淡无光泽及整体肤况的严重程度评分：采用问卷方式请各受试者对于上述三个项目进行评分。[0138]测试方式：[0139]令8位受试者每日饮用4ml实施例所制得的丹凤牡丹萃取物c，并连续饮用4周。于饮用前(即第0周，又称对照组)及饮用4周后(即第4周，又称为实验组)，分别使用上述仪器设备测定各受试者的面部肌肤状况，并且由各受试者调写问卷评分。问卷中选择0分代表无困扰、选择1分代表轻微、选择2分代表中等、选择3分代表严重、选择4分代表非常严重。将每位受试者第0周的分数为换算成100％，第4周的分数以换算公式(w4分数-w0分数)/w0分数*100 100计分。[0140]于此，于饮用前、后进行仪器检测时，受试者所在的测试区域的温度与湿度为一致，以减少外界的温湿度等因素会对皮肤所造成的影响。[0141]其中，各组之间的统计学显著差异是藉由学生t-试验来统计分析。在如图6到图11中，「*」代表在与控制组比较下其p值小于0.05，即实验组与对照组具有统计上的显著差异。[0142]需要特别说明的是，下图中显示的系以相对倍率呈现，即将空白组的定量结果视为100％来将实验组的定量结果换算成相对于空白组的表现量。[0143]测试结果：[0144]请参阅图6，经过四周的每日饮用丹凤牡丹萃取物后，8位受试者的平均皮肤含水率由100％上升到105.1％。意即，每日饮用4ml丹凤牡丹萃取物可以有效提升皮肤含水率达5.1％。[0145]请参阅图7，经过四周的每日饮用丹凤牡丹萃取物后，8位受试者的平均经皮水分散失率由100％下降到83.7％。意即，每日饮用4ml丹凤牡丹萃取物可以有效降低经皮水分散失率达16.3％。[0146]请参阅图8，经过四周的每日饮用丹凤牡丹萃取物后，8位受试者的平均肌肤弹力由100％上升到107.3％。意即，每日饮用4ml丹凤牡丹萃取物可以显著提升皮肤弹力达7.3％。[0147]请参阅图9，经过四周的每日饮用丹凤牡丹萃取物后，8位受试者的平均肌肤皱纹量由100％下降到88.6％。意即，每日饮用4ml丹凤牡丹萃取物可以有效减少肌肤皱纹达11.4％。[0148]请参阅图10，经过四周的每日饮用丹凤牡丹萃取物后，8位受试者的平均肌肤纹理(也可称粗糙度)量由100％下降到93.0％。意即，每日饮用4ml丹凤牡丹萃取物可以有效减少肌肤纹理达7％。[0149]请参阅图11。8位受试者经过四周的每日饮用丹凤牡丹萃取物后，分别对于肌肤干燥紧绷的严重程度进行自我平分，其理肌肤干燥紧绷的严重程度由100％下降到61.5％。意即，每日饮用4ml丹凤牡丹萃取物可以让人明显感受到肌肤干燥紧绷的程度得到改善。[0150]续参阅图11。8位受试者经过四周的每日饮用丹凤牡丹萃取物后，分别对于黯淡无光泽的严重程度进行自我平分，其理肌肤黯淡无光泽的严重程度由100％下降到66.7％。意即，每日饮用4ml丹凤牡丹萃取物可以让人明显感受到黯淡无光泽的程度得到改善。[0151]续参阅图11。8位受试者经过四周的每日饮用丹凤牡丹萃取物后，分别对于整体肤况不佳进行自我评分。其对于整体肤况不佳的感受由100％下降到69.2％。意即，每日饮用4ml丹凤牡丹萃取物可以让人明显感受到整体肤况质量提升。[0152]实施例八：丹凤牡丹萃取物外用组合物人体试验[0153]面膜成份及制作：[0154]首先，制作含有丹凤牡丹萃取物的精华液，其配方包括：三仙胶0.2wt％、馨鲜酮0.6wt％、1,3-丁二醇5wt％、三乙醇胺0.1wt％、己二醇0.6wt％、丹凤牡丹萃取物0.5wt％，其余为水。其中，此丹凤牡丹萃取物系由实施例一之制备方式而得的丹凤牡丹萃取物b。[0155]接着，丹凤牡丹萃取物面膜(以面膜布浸泡于含有丹凤牡丹萃取物的精华液中，使其充分吸收后制得)以及对照组面膜(以相同型号的面膜布浸泡于与前述精华液中，但其中的丹凤牡丹萃取物替换成等重的水)，再使其充分吸收后制得。于此实施例中，各面膜系含20ml的对应精华液。意即，丹凤牡丹萃取物面膜是含有5％丹凤牡丹萃取物的面膜。[0156]测试项目及仪器：[0157]1、肌肤弹力(elasticity)：使用购自德国courage khazakaelectronic公司之肌肤弹力检测探头mpa580(c kmultiprobeadaptersystem,germany)对受试者的面部肌肤进行检测。测试原理是基于吸力和拉伸原理，在被测试的皮肤表面产生一个负压将皮肤吸进一个测试探头内，透过光学测试系统检测皮肤被吸进探头内的深度，并以软件分析计算皮肤弹性与紧实度。[0158]2、肌肤含水量(hydration)：使用购自德国courage khazakaelectronic公司之肌肤含水量检测探头cm825(c kmultiprobeadaptersystem,germany)对同受试者的面部肌肤进行检测。该检测探头系基于电容的原理进行测量。当水分含量发生变化时，皮肤的电容值亦发生变化，故可通过测定皮肤电容值，分析皮肤表面的含水量。[0159]3、肌肤光泽(brightness)：使用德国courage khazakaelectronic公司之肌肤光泽度检测探头glossymetergl200(c kmultiprobeadaptersystem,germany)对受试者的面部肌肤进行检测该仪器是由照射到皮肤表面的光的直接反射和散反射来进行测试与计算。当测量数值越高，说明皮肤越具有光泽。[0160]4、肌肤泛红(redness)：使用美国canfield所贩卖之visia高阶数字肤质检测仪对受试者的面部肌肤进行检测。系以rbx偏振光技术进行脸部肌肤拍摄，侦测皮肤深层血管或血红素。测量数值越高，说明皮肤泛红状况越严重。[0161]受试者：8位受试者(20到55岁之间的成年人)。[0162]测试方式：[0163]受试者将全脸清洁后，依据上述检测项目，使用对应的仪器及测量方式，纪录左右半脸于使用面膜前之数值，以此使用前数值为基准(100％)。接下来，分别将丹凤牡丹萃取物面膜以及安慰剂面膜贴敷于受试者的右半脸及左半脸上，经15分钟后取下，再以指腹稍加按摩左半脸与右半脸。待面膜移除约5分钟后，再以对应的仪器及测量方式，进行测量或拍摄照片，再与自身原左半脸、或右半脸之数值进行比较，以得到使用后的数值(％)。于此，使用前与使用后欲进行检测时，受试者所在的测试区域的温度与湿度为一致，以减少外界的温湿度等因素会对皮肤所造成的影响。[0164]于此，右半脸使用丹凤牡丹萃取物面膜为实验组，左半脸使用安慰剂面膜为对照组。[0165]其中，各组之间的统计学显著差异是藉由学生t-试验来统计分析。在如图12到图15中，「*」代表在与控制组比较下其p值小于0.05，即实验组与对照组具有统计上的显著差异。[0166]需要特别说明的是，下图中显示的系以相对倍率呈现，即将空白组的定量结果视为100％来将实验组的定量结果换算成相对于空白组的表现量。[0167]测试结果：[0168]请参阅图12，经过使用丹凤牡丹萃取物面膜15分钟后，8位受试者的平均肌肤弹力由100％上升到123.5％，而使用对照组面膜15分钟后，8位受试者的平均肌肤弹力由100％仅上升到108.8％。意即，外用丹凤牡丹萃取物可以显著提升皮肤弹力达23.5％，而对照组面膜仅提升8.8％。[0169]请参阅图13，经过使用丹凤牡丹萃取物面膜15分钟后，8位受试者的平均肌肤含水量由100％上升到120.2％，而使用对照组面膜15分钟后，8位受试者的平均肌肤含水量由100％仅上升到113.7％。意即，外用丹凤牡丹萃取物可以显著提升皮肤含水量达20.2％，而对照组面膜仅提升13.7％。[0170]请参阅图14，经过使用丹凤牡丹萃取物面膜15分钟后，8位受试者的平均肌肤光泽由100％上升到115.1％，而使用对照组面膜15分钟后，8位受试者的平均肌肤光泽由100％仅上升到105.5％。意即，外用丹凤牡丹萃取物可以显著提升皮肤光泽达15.1％，而对照组面膜仅提升5.5％。[0171]请参阅图15，经过使用丹凤牡丹萃取物面膜15分钟后，8位受试者的平均肌肤泛红由100％降到74.2％，而使用对照组面膜15分钟后，8位受试者的平均肌肤泛红由100％降到89.7％。意即，外用丹凤牡丹萃取物可以显著降低皮肤泛红状态达25.8％，而对照组面膜仅降低10.3％。[0172]综上所述，根据本发明任一实施例的丹凤牡丹萃取物，其可用于制备皮肤调理的组合物。换言之，前述之组合物具有下列一种或多种功能：提升皮肤细胞玻尿酸生成量、提升皮肤保湿纤维含量、维持皮肤角质细胞结构、提升皮肤内的丝聚蛋白的含量、调节皮肤细胞水分含量，降低经皮水分散失量及提升肌肤弹力等。[0173]虽然本发明的技术内容已经以较佳实施例揭露如上，然其并非用以限定本发明，任何熟习此技艺者，在不脱离本发明之精神所作些许之更动与润饰，皆应涵盖于本发明的范畴内，因此本发明之保护范围当视后附之申请专利范围所界定者为准。[0174]当然，本发明还可有其它多种实施例，在不背离本发明精神及其实质的情况下，熟悉本领域的技术人员可根据本发明作出各种相应的改变和变形，但这些相应的改变和变形都应属于本发明权利要求的保护范围。当前第1页12当前第1页12
技术特征：
1.一种丹凤牡丹萃取物的用途，其特征在于，其是用于制备皮肤调理的组合物，且该丹凤牡丹萃取物提取自丹凤牡丹的花朵。2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，该丹凤牡丹萃取物用以提升皮肤细胞玻尿酸生成量。3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于，该丹凤牡丹萃取物用以提升has2基因表现量及has3基因表现量。4.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，该丹凤牡丹萃取物用以维持皮肤角质细胞结构。5.根据权利要求4所述的用途，其特征在于，该丹凤牡丹萃取物用以提升tgm1基因表现量及角蛋白相关基因表现量。6.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，该丹凤牡丹萃取物用以调节皮肤细胞水分含量。7.根据权利要求6所述的用途，其特征在于，该丹凤牡丹萃取物用以提升aqp3基因表现量及gba基因表现量。8.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，该丹凤牡丹萃取物用以提升皮肤丝聚蛋白含量。9.根据权利要求8所述的用途，其特征在于，该丹凤牡丹萃取物用以提升flg基因表现量。10.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，该皮肤调理包括：提升肌肤含水量、降低经皮水分散失量、及提升肌肤弹力。11.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，该组合物为一食品组合物，且该丹凤牡丹萃取物有效剂量为4ml/日。12.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，该组合物为一外用组合物，且该丹凤牡丹萃取物的有效浓度至少5％。

技术总结
本发明公开一种丹凤牡丹萃取物用于制备皮肤调理组合物的用途，其中丹凤牡丹萃取物提取自丹凤牡丹的花朵。取自丹凤牡丹的花朵。取自丹凤牡丹的花朵。


技术研发人员：林咏翔 李唯君
受保护的技术使用者：百岳特生物技术（上海）有限公司
技术研发日：2021.10.26
技术公布日：2022/5/25